DNA 变性与退火
有谁了解 ssDNA 高温变性 缓慢降到室温 以及 高温变性后 立即降到4度 保持一段时间 两种方式效果有什么不同?我的目标是ssDNA与相应的靶向分子或是蛋白相结合时,采用哪一种方式使得结合更有效呢?谢谢
[ Last edited by 海阔天空102 on 2012-12-5 at 17:20 ]
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有谁了解 ssDNA 高温变性 缓慢降到室温 以及 高温变性后 立即降到4度 保持一段时间 两种方式效果有什么不同?我的目标是ssDNA与相应的靶向分子或是蛋白相结合时,采用哪一种方式使得结合更有效呢?谢谢
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我用的是可以binding蛋白的适配体 即单链DNA,目的是能有效bingding蛋白,那为什么迅速降温比较好呢?
简单地说就是缓慢降温DNA还可以杂交,迅速降温就几乎不可以了。就是复性的问题
https://baike.baidu.com/view/1017120.htm复性的解释
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标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本
放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封
袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标
本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的
OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(n/5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
特别和注意:ssDNA 高温变性 缓慢降到室温 有利于形成二级结构
立即降到4度 防止形成二级结构,多用于双链DNA变性后产生单链DNA,