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海阔天空102

木虫 (正式写手)

[求助] DNA 变性与退火

有谁了解 ssDNA 高温变性 缓慢降到室温  以及 高温变性后 立即降到4度  保持一段时间 两种方式效果有什么不同？我的目标是ssDNA与相应的靶向分子或是蛋白相结合时，采用哪一种方式使得结合更有效呢？谢谢

[ Last edited by 海阔天空102 on 2012-12-5 at 17:20 ]
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1楼 2012-12-05 17:14:20
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回帖置顶 ( 共有1个 )

shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
海阔天空102: 金币+5, 博学EPI+1 2012-12-05 23:10:20
dna是用作是配体吧？一般都是室温退火呢，还是头一次听说要放到四度。楼主自己实验一下不就清楚了么。
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3楼2012-12-05 21:14:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

海阔天空102

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Jason_LuYZ at 2012-12-09 22:44:20
缓慢降温有利于复性 形成二级结构等，迅速降温不利于复性，你可以参看王镜岩《生物化学》核酸性质那一章节相关内容。
你的实验是要ssDNA, 所以建议你采用迅速降温方式处理人的ssDNA.祝好！

我用的是可以binding蛋白的适配体 即单链DNA，目的是能有效bingding蛋白，那为什么迅速降温比较好呢？
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9楼2012-12-10 08:41:02
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wolfghost

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

为什么要采用这两种降温方法？目的何在？
哪种结合更有效，可以直接实验表现出来不？

楼主，我以外行人，但是旁观的心态提的问题，仅供参考哈
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大刀向鬼子的头上砍去！ChopJapstoDeath!
2楼2012-12-05 20:06:05
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海阔天空102

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfghost at 2012-12-05 20:06:05
为什么要采用这两种降温方法？目的何在？
哪种结合更有效，可以直接实验表现出来不？

楼主，我以外行人，但是旁观的心态提的问题，仅供参考哈

目的是更有效的结合，但目前没有发现特异性的结合，所以在考虑是什么原因。想到了DNA结构是不是需要activation，才能更有效的结合。问一下原理性或是经验性的知识
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4楼2012-12-05 23:08:05
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海阔天空102

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shixiaba at 2012-12-05 21:14:17
dna是用作是配体吧？一般都是室温退火呢，还是头一次听说要放到四度。楼主自己实验一下不就清楚了么。

什么叫室温退火，是不是高温缓慢降到室温？本人不是学生物的，
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5楼2012-12-05 23:09:15
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shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 海阔天空102 at 2012-12-05 23:09:15
什么叫室温退火，是不是高温缓慢降到室温？本人不是学生物的，...

我做的时候95摄氏度变性，然后室温放置一小时。如果楼主做的是可以和蛋白特异性偶联的配体的话不妨多放一会儿，两个小时怎么都够了。
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6楼2012-12-06 10:36:38
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更深的蓝

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
海阔天空102: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-12-06 15:15:07
ssDNA 高温变性 缓慢降到室温 有利于形成二级结构
立即降到4度 防止形成二级结构，多用于双链DNA变性后产生单链DNA
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低调务实！
7楼2012-12-06 13:20:42
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Jason_LuYZ

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

缓慢降温有利于复性 形成二级结构等，迅速降温不利于复性，你可以参看王镜岩《生物化学》核酸性质那一章节相关内容。
你的实验是要ssDNA, 所以建议你采用迅速降温方式处理人的ssDNA.祝好！
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Ialwaysbelivethattherewardsisparalledtoone'sdevotion~
8楼2012-12-09 22:44:20
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lucias

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
海阔天空102: 金币+10 2013-05-13 10:10:37
简单地说就是缓慢降温DNA还可以杂交，迅速降温就几乎不可以了。就是复性的问题
https://baike.baidu.com/view/1017120.htm复性的解释
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10楼2012-12-26 09:21:01
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