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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA 复性的问题
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longyu2728

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA 复性的问题

“2.复性

变性DNA在适当条件下，两条互补链可重新恢复天然的双螺旋构象，这种现象称为复性。热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程也叫退火，一般认为，比Tm值低 25℃ 的温度是DNA复性的最佳条件。 ”


DNA的复性 ，我现在有两条DNA链，a和b，它们是完全互补配对的，我怎么做才能是他两个变为双链DNA呢，



我的DNA链是 每条，是共10个碱基，其中一半是GC,一半是AT的

谢谢谢谢谢！
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1楼 2010-12-09 20:32:43
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fangxingbaixue

木虫 (知名作家)
呵呵，这个正是我遇到的问题
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2楼2010-12-09 20:50:14
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fangxingbaixue

木虫 (知名作家)
        Synthesis of dDNA with Oligo DNA
        V(H2O)= OD(number)*33*20000/Oligo molecular weight (unit: ul)
Oligo DNA-A: 100uM  VH2O=nmolx10=91ul
Oligo DNA-B: 100uM  VH2O=91ul
        Annealing reaction system preparation
Nuclear free water: 40ul
Annealing buffer for DNA Oligo(5x): 20ul
Oligo DNA-A(100uM): 20ul
Oligo DNA-B(100uM): 20ul
Total volume: 100ul
dDNA concentration: 20uM/10uM
        Annealing reaction procedure using PCR
Procedure        Temperature(℃)        Time(min)        specification
1        95        2        Oligo denatured
2        0.1℃/8s-25℃ or 1℃/90s-25℃        Approximate 90        Annealing
3        4        long time        Temperature storage
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3楼2010-12-09 20:52:18
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fangxingbaixue

木虫 (知名作家)
★ ★
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-09 21:24:19
http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=103538047q3swbliu2ibaw0u
LZ可以看看这个资料里面的“使用说明”部分，就知道如何由互补的oligo DNA合成出双链DNA了~~~
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4楼2010-12-09 20:55:45
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melinda_ldj5383

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
非常感谢楼主！哈哈
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5楼2011-09-01 13:54:45
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haimingwei

铜虫 (小有名气)
哇，不懂。
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6楼2011-12-20 21:53:30
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Sunlisa

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by fangxingbaixue at 2010-12-09 20:55:45
http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=103538047q3swbliu2ibaw0u
LZ可以看看这个资料里面的“使用说明”部分，就知道如何由互补的oligo DNA合成出双链DNA了~~~

非法参数啊，怎么才能打开啊
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7楼2014-11-29 11:35:28
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Sunlisa

金虫 (正式写手)
楼主，您已经有经验了吧，求帮助，我也在做复性，求经验知道，谢谢！ssDNA浓度多少比较合适？
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8楼2014-11-29 11:36:21
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