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longyu2728

金虫 (正式写手)

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在线: 77.2小时
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[交流] 【求助/交流】DNA 复性的问题

“2.复性

变性DNA在适当条件下，两条互补链可重新恢复天然的双螺旋构象，这种现象称为复性。热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程也叫退火，一般认为，比Tm值低 25℃ 的温度是DNA复性的最佳条件。 ”

DNA的复性，我现在有两条DNA链，a和b，它们是完全互补配对的，我怎么做才能是他两个变为双链DNA呢，

我的DNA链是每条，是共10个碱基，其中一半是GC,一半是AT的

谢谢谢谢谢！

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1楼2010-12-09 20:32:43

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fangxingbaixue

木虫 (知名作家)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 324877

 Synthesis of dDNA with Oligo DNA
 V(H2O)= OD(number)*33*20000/Oligo molecular weight (unit: ul)
Oligo DNA-A: 100uM VH2O=nmolx10=91ul
Oligo DNA-B: 100uM VH2O=91ul
 Annealing reaction system preparation
Nuclear free water: 40ul
Annealing buffer for DNA Oligo(5x): 20ul
Oligo DNA-A(100uM): 20ul
Oligo DNA-B(100uM): 20ul
Total volume: 100ul
dDNA concentration: 20uM/10uM
 Annealing reaction procedure using PCR
Procedure Temperature(℃) Time(min) specification
1 95 2 Oligo denatured
2 0.1℃/8s-25℃ or 1℃/90s-25℃ Approximate 90 Annealing
3 4 long time Temperature storage