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DNA 变性与退火

作者 海阔天空102: 来源: 小木虫 500 10 举报帖子

有谁了解 ssDNA 高温变性缓慢降到室温以及高温变性后立即降到4度保持一段时间两种方式效果有什么不同？我的目标是ssDNA与相应的靶向分子或是蛋白相结合时，采用哪一种方式使得结合更有效呢？谢谢

[ Last edited by 海阔天空102 on 2012-12-5 at 17:20 ] 返回小木虫查看更多

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精华评论

wolfghost

为什么要采用这两种降温方法？目的何在？
哪种结合更有效，可以直接实验表现出来不？

楼主，我以外行人，但是旁观的心态提的问题，仅供参考哈
shixiaba

dna是用作是配体吧？一般都是室温退火呢，还是头一次听说要放到四度。楼主自己实验一下不就清楚了么。
海阔天空102

引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfghost at 2012-12-05 20:06:05
为什么要采用这两种降温方法？目的何在？
哪种结合更有效，可以直接实验表现出来不？

楼主，我以外行人，但是旁观的心态提的问题，仅供参考哈

目的是更有效的结合，但目前没有发现特异性的结合，所以在考虑是什么原因。想到了DNA结构是不是需要activation，才能更有效的结合。问一下原理性或是经验性的知识
，
海阔天空102

引用回帖:
3楼: Originally posted by shixiaba at 2012-12-05 21:14:17
dna是用作是配体吧？一般都是室温退火呢，还是头一次听说要放到四度。楼主自己实验一下不就清楚了么。

什么叫室温退火，是不是高温缓慢降到室温？本人不是学生物的，
shixiaba

引用回帖:
5楼: Originally posted by 海阔天空102 at 2012-12-05 23:09:15
什么叫室温退火，是不是高温缓慢降到室温？本人不是学生物的，...

我做的时候95摄氏度变性，然后室温放置一小时。如果楼主做的是可以和蛋白特异性偶联的配体的话不妨多放一会儿，两个小时怎么都够了。
更深的蓝

ssDNA 高温变性缓慢降到室温有利于形成二级结构
立即降到4度防止形成二级结构，多用于双链DNA变性后产生单链DNA
Jason_LuYZ

缓慢降温有利于复性形成二级结构等，迅速降温不利于复性，你可以参看王镜岩《生物化学》核酸性质那一章节相关内容。
你的实验是要ssDNA, 所以建议你采用迅速降温方式处理人的ssDNA.祝好！