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双酶切的反应体系和时间

作者 yoyoyehan: 来源: 小木虫 450 9 举报帖子

各位虫友有做过XbaI和XhoI双酶切的么?
我用这两个酶切  反应体系  XbaI  1ul，
                                       XhoI 1ul，
                                    10  M 2ul，
                                       质粒  5ul，
                                    ddH2O  11ul
                        37度  6小时，但是酶切后效果不好，请问大家的反应体系和反应条件是怎么样的呀？返回小木虫查看更多

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精华评论

susizheng

如果是TaKaRa的酶，将酶切体系扩大一倍试试。
xiaoai8039

关键问题是：你的质粒浓度是不是太高或太低了？？？
检测一下浓度是多大，从而来确定酶的用量，一般酶的用量要稍大些。
小小豆豆

先检测一下质粒浓度，在确定酶得用量
银杏下

得看你是哪个公司的酶，比如NEB的是可以同时酶切，而fermentas的是不可以的。另外你这个体系我认为是酶加多了，一般XhoI 50uL体系加1uL就可以了，你20uL就加了1uL，根据我的经验，酶加多了反而是切割不能完全。
yoyoyehan

引用回帖:
Originally posted by 银杏下 at 2009-11-4 14:33:
得看你是哪个公司的酶，比如NEB的是可以同时酶切，而fermentas的是不可以的。另外你这个体系我认为是酶加多了，一般XhoI 50uL体系加1uL就可以了，你20uL就加了1uL，根据我的经验，酶加多了反而是切割不能完全。

我用的是TaKaRa的酶，请问你用的是这个么
，
宛辰

我们用的是takala的，但是我们只酶切3个小时，没切过那么久，你可以试试把时间减少点，再有就是你的质粒不要太多，要是质粒很浓的话，加那么多，体系还小，容易切得效果不好！