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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切的反应体系和时间
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yoyoyehan

[交流] 双酶切的反应体系和时间

各位虫友有做过XbaI和XhoI双酶切的么?
我用这两个酶切  反应体系  XbaI  1ul，
                                          XhoI   1ul，
                                        10  M   2ul，
                                           质粒  5ul，
                                       ddH2O  11ul
                           37度  6小时，但是酶切后效果不好，请问大家的反应体系和反应条件是怎么样的呀？
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1楼 2009-11-03 22:02:49
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
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如果是TaKaRa的酶，将酶切体系扩大一倍试试。
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Thank-you，so-blue.
2楼2009-11-04 09:41:29
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xiaoai8039

铜虫 (小有名气)
★
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关键问题是：你的质粒浓度是不是太高或太低了？？？
检测一下浓度是多大，从而来确定酶的用量，一般酶的用量要稍大些。
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3楼2009-11-04 10:22:19
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小小豆豆

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先检测一下质粒浓度，在确定酶得用量
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4楼2009-11-04 10:27:31
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黑罕

金虫 (小有名气)
分步酶切
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5楼2009-11-04 12:38:52
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银杏下

金虫 (小有名气)
★
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得看你是哪个公司的酶，比如NEB的是可以同时酶切，而fermentas的是不可以的。另外你这个体系我认为是酶加多了，一般XhoI 50uL体系加1uL就可以了，你20uL就加了1uL，根据我的经验，酶加多了反而是切割不能完全。
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6楼2009-11-04 14:33:24
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yoyoyehan

引用回帖:
Originally posted by 银杏下 at 2009-11-4 14:33:
得看你是哪个公司的酶，比如NEB的是可以同时酶切，而fermentas的是不可以的。另外你这个体系我认为是酶加多了，一般XhoI 50uL体系加1uL就可以了，你20uL就加了1uL，根据我的经验，酶加多了反而是切割不能完全。

我用的是TaKaRa的酶，请问你用的是这个么？
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7楼2009-11-04 14:56:24
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宛辰

木虫 (小有名气)
★
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我们用的是takala的，但是我们只酶切3个小时，没切过那么久，你可以试试把时间减少点，再有就是你的质粒不要太多，要是质粒很浓的话，加那么多，体系还小，容易切得效果不好！
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8楼2009-11-04 15:21:56
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小白3521

金虫 (小有名气)
★
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我最近也在做双酶切，用的takara的，试过很多体系，结果不是很理想
再不行，我就换fermentas的酶，听说很好
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9楼2009-11-04 22:20:46
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断弦的琴

铁虫 (小有名气)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 11-10 11:37
TAKARA的酶虽然说 3~5u可以 切1ugDNA，但是我认为10U才能切1ug的。
你按照 10u切 1ug 试试，而且每种酶切它的 单位体积的u单位也不一样。
ps:3h之后酶几乎没什么活力了。
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不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
10楼2009-11-10 11:04:30
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