应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切的反应体系和时间
101/1返回列表
查看: 5541  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

yoyoyehan

[交流] 双酶切的反应体系和时间

各位虫友有做过XbaI和XhoI双酶切的么?
我用这两个酶切  反应体系  XbaI  1ul，
                                          XhoI   1ul，
                                        10  M   2ul，
                                           质粒  5ul，
                                       ddH2O  11ul
                           37度  6小时，但是酶切后效果不好，请问大家的反应体系和反应条件是怎么样的呀？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-11-03 22:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果是TaKaRa的酶，将酶切体系扩大一倍试试。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2009-11-04 09:41:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoai8039

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
关键问题是：你的质粒浓度是不是太高或太低了？？？
检测一下浓度是多大，从而来确定酶的用量，一般酶的用量要稍大些。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-11-04 10:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小豆豆

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先检测一下质粒浓度，在确定酶得用量
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-11-04 10:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑罕

金虫 (小有名气)
分步酶切
回复此楼
5楼2009-11-04 12:38:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

银杏下

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
得看你是哪个公司的酶，比如NEB的是可以同时酶切，而fermentas的是不可以的。另外你这个体系我认为是酶加多了，一般XhoI 50uL体系加1uL就可以了，你20uL就加了1uL，根据我的经验，酶加多了反而是切割不能完全。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-11-04 14:33:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyoyehan

引用回帖:
Originally posted by 银杏下 at 2009-11-4 14:33:
得看你是哪个公司的酶，比如NEB的是可以同时酶切，而fermentas的是不可以的。另外你这个体系我认为是酶加多了，一般XhoI 50uL体系加1uL就可以了，你20uL就加了1uL，根据我的经验，酶加多了反而是切割不能完全。

我用的是TaKaRa的酶，请问你用的是这个么？
赞一下 回复此楼
7楼2009-11-04 14:56:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宛辰

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们用的是takala的，但是我们只酶切3个小时，没切过那么久，你可以试试把时间减少点，再有就是你的质粒不要太多，要是质粒很浓的话，加那么多，体系还小，容易切得效果不好！
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-11-04 15:21:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我最近也在做双酶切，用的takara的，试过很多体系，结果不是很理想
再不行，我就换fermentas的酶，听说很好
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-11-04 22:20:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

断弦的琴

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 11-10 11:37
TAKARA的酶虽然说 3~5u可以 切1ugDNA，但是我认为10U才能切1ug的。
你按照 10u切 1ug 试试，而且每种酶切它的 单位体积的u单位也不一样。
ps:3h之后酶几乎没什么活力了。
赞一下(21人) 回复此楼
不知道失去了多少以后我们能不再痛苦,不知道偿多少冷暖以后我们能看破生命.
10楼2009-11-10 11:04:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yoyoyehan 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 +7 小聂爱学习 2026-04-14 7/350 2026-04-16 00:19 by cuisz
[考研] 药学求调剂 +12 喽哈加油 2026-04-14 14/700 2026-04-15 23:49 by 陈皮皮
[考研] 284求调剂 +21 让我上岸吧阿西 2026-04-09 21/1050 2026-04-15 21:53 by noqvsozv
[考研] 322求调剂 +7 123安康 2026-04-12 14/700 2026-04-15 21:48 by noqvsozv
[考研] 求助调剂，跨调 +19 X十甫寸Y 2026-04-11 20/1000 2026-04-15 21:18 by cuisz
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 071000生物学调剂求助 +18 zzzzwww 2026-04-09 21/1050 2026-04-14 15:39 by zs92450
[考研] 食品与营养（0955）271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-11 8/400 2026-04-14 09:04 by pengliang8036
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 调剂 +6 青灯不负 2026-04-09 6/300 2026-04-11 20:35 by dongdian1
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 087100初试311求调剂 +4 任雅琴 2026-04-09 4/200 2026-04-11 10:33 by zhq0425
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 085402通信工程调剂，有4项学科竞赛国奖（电赛国二），硕士研究生调剂自荐信。 +5 m永o不v言o弃m 2026-04-09 5/250 2026-04-11 09:33 by zhq0425
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭