用过NdeⅠ和XhoⅠ的帮帮忙啊
我打算用NdeⅠ和XhoⅠ这两个酶做双酶切，但是据说这两个酶酶切效率和连接效率都很低，请问
1. 这两个酶能同时做双切吗？还是要单独切？
2. 酶切时的酶和载体的量是多少？温度、时间呢？
3. 这两个酶切后vector和外源基因的比例是多少？时间？温度？
总之，有用过的就进来讲讲经验吧，希望能使试验进行顺利一些，谢谢啦
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用NEB的酶1个小时绰绰有余……混用酶效果不好……
Nde I不太好切，保护碱基在7个的酶切效率是75％，如果还是酶切不成功TA克隆到载体上再酶切，这样效果比较好，