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「1图1案例」Masson三色染色一次成功：避开实验雷区，轻松做出漂亮切片
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老板刚刚通知，贪吃的db/db ii型糖尿病小鼠模型就要来了，准备做masson染色吧。可是上周不是说只做he吗？唉，我还得查资料。 db/db小鼠心肌细胞案例 幸运女神总是会眷顾我的！南京医科大学季勇教授团队发表在acta pharmacologica sinica（if 7.169）期刊的文章正好采用masson三色染色检查司美格鲁肽的抗纤维化作用，用到的动物模型也刚好是db/db 小鼠。结果显示，与野生型（wt）小鼠的心肌组织相比，db/db 小鼠心肌组织中的蓝色胶原沉淀大量增加，胶原容积分数（cvf）显著升高。而司美格鲁肽干预后，胶原沉积减少，胶原容积分数显著降低。  图片源自文献：semaglutide administration protects cardiomyocytes in db/db mice via energetic improvement and mitochondrial quality control. doi: 10.1038/s41401-024-01448-9 从图中，我们可以看出masson不仅能直观的显示心肌纤维的变化情况，还能进行定量统计分析，以及结合i型胶原（col i）和iii型胶原（col iii）的mrna表达结果，证实司美格鲁肽可显著缓解db/db小鼠的心肌纤维化。 我的研究材料和目的跟这篇文章的非常相近，正好可以借用他们的研究思路。接下来就是落实masson染色技术的操作步骤了。  通过这张masson三色染色操作示意图，我们可以看出，高质量的切片需要做到： 切片厚度适中 一般为3-5μm。切片太厚的话会造成颜色重叠，组织结构难以区分。如果太薄则染色浅，甚至容易碎裂。 分化时间要灵活 盐酸酒精分化、磷钼酸分色的时间需要根据实验室自身环境进行调整，不用太死板，必要的时候可以在显微镜下观察。 注意试剂有效期 注意试剂有效期：铁苏木素、丽春红、苯胺蓝这些试剂在使用时要先观察是否氧化、失效。如果出现沉淀、变色、分层等情况，建议换新的染色，避免导致染色失败。 对照设置要合理  在完成对masson实验操作的学习后，我顺便查了查三色染色常踩的雷有哪些，做到有备无患。 胶原纤维呈红色或紫红色，而非蓝色 建议按照下表逐项进行核查。  肌纤维呈蓝紫色或蓝灰色，而非红色 出现这种情况，我们也要排出个优先级。 首要原因是磷钼酸过度分化。其处理时间超过15min或浓度过高（>2%）时，会将肌纤维上的丽春红洗脱掉，与后续的苯胺蓝发生结合。因此，我们在进行实验时，要严格控制时间。如果在常规时间还会出现蓝紫色，建议我们缩短磷钼酸分化时间（5-10min），或将其浓度降到1%甚至0.5%。 丽春红染色时间不足或染液失效，红色信号本身不饱和，也会出现这种情况。建议我们延长丽春红染色至15min，或重新配制染液。还有一种情况是苯胺蓝染色过度，可以尝试缩短其浸泡时间。 细胞核染色模糊或褪色 细胞核染色不正常，我们首先要考虑weigert铁苏木素是不是老化或失效了。weigert铁苏木素a、b液需要现配现用，混合后24小时内用完。如果试剂没有问题，我们可以适当延长5min或者重复染一次看看效果。我们还要注意盐酸酒精分化和返蓝时间。 背景弥漫性蓝染或红染 苯胺蓝浓度过高或冰醋酸洗涤不充分会造成切片背景蓝染。建议我们将苯胺蓝浓度降至1%或者延长冰醋酸洗涤时间。丽春红染色后充分去除浮色或磷钼酸分化不够，将会造成切片背景红染，建议我们增加蒸馏水快速冲洗步骤。 切片局部或整体不着色  切片脱落或组织脱落 这是一个老生常谈的话题，我们应该不会再出现这种情况了吧？我们可以使用黏附玻片、充分烤片、控制厚度等使切片牢牢黏贴。在染色过程中，我们也要小心操作，比如将水流调至细流，避免直接冲击组织。 通过查阅文献、搜集案例和避坑指南，我总算把masson三色染色的实验思路、操作步骤整理清晰，接下来就是“甩开膀子加油干”了。通过回顾上述常见问题，我们在实操时，要注意试剂的状态、关键步骤的时间以及实验室环境温度。只有我们严格把控每一个细节，就能一次成功，做出漂亮的片子。 互动话题 你做masson染色时踩过最大的坑是什么？是胶原不蓝、肌纤维发紫，还是细胞核模糊一片？欢迎在评论区分享你的"翻车"经历和解决方法，大家一起避坑！ |
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2026-05-21 18:39:13, 541.48 K
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