不应该吧，你转到板子上看看，看能不能生长，让它复苏一下，再液体培养，如果这样还不行，是不是你保存的不好，细胞冻死了

你冻存是用的80%的甘油吗？在冻存管中菌液取0.8ml，80%甘油0.2ml
一般冻存的菌株采用“慢冻速溶”的方法，就是在冻存时，准备冻存菌液要先在4C°冰箱中4h，再放入-20C°冰箱中过夜，次日放入-80C°超低温冰箱中保藏。如果直接放入
-80C°超低温冰箱中容易将菌种冻死。
解冻时应该快速，直接从-80C°超低温冰箱中取出，在30C°水浴锅中放置1~2min，解冻后在平皿上涂平板，菌株复活后，在平皿上划线，纯化菌株后，挑单菌落至试管斜面。
我想你的菌株冻死的可能性较大，

我们实验室在冻存细菌时都是在—80度冰箱里直来直去的，没有采用楼上所说的方法，也没出过什么问题。
质粒在细菌传代过多的情况下容易丢失，甘油保存应该没什么问题吧

加入甘油后混匀了吗？我加都是加60%的甘油，与菌液对半加入

这4个月中间有几次停电，反复的冻融影响有多大？

反复冻融影响不大！我经常反复冻融接菌，从来没有出现问题！
最大的可能就是你的甘油管做的有问题，菌都已经冻死了！在抗性平板上筛选一下吧！

我都是摇一摇直接放进去-70度,划菌时不用融,直接用接种环刮一下划线