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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 甘油管保种，质粒丢失原因？
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liumikewolf

金虫 (小有名气)

[交流] 甘油管保种，质粒丢失原因？

甘油管保藏大肠杆菌，内含amp 和km 抗性质粒，保存4个月后，接种液体抗性培养基，没有生长！难道质粒丢失了吗？急寻答案!!!!!!!!
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1楼 2008-07-25 09:47:30
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)
★
lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):呵呵，谢谢
不应该吧，你转到板子上看看，看能不能生长，让它复苏一下，再液体培养，如果这样还不行，是不是你保存的不好，细胞冻死了
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2楼2008-07-25 10:46:59
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春雨秋实

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):thx
你冻存是用的80%的甘油吗？在冻存管中菌液取0.8ml，80%甘油0.2ml
一般冻存的菌株采用“慢冻速溶”的方法，就是在冻存时，准备冻存菌液要先在4C°冰箱中4h，再放入-20C°冰箱中过夜，次日放入-80C°超低温冰箱中保藏。如果直接放入
-80C°超低温冰箱中容易将菌种冻死。
解冻时应该快速，直接从-80C°超低温冰箱中取出，在30C°水浴锅中放置1~2min，解冻后在平皿上涂平板，菌株复活后，在平皿上划线，纯化菌株后，挑单菌落至试管斜面。
我想你的菌株冻死的可能性较大
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3楼2008-07-25 11:10:01
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Frank2007198

铜虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
我们实验室在冻存细菌时都是在—80度冰箱里直来直去的，没有采用楼上所说的方法，也没出过什么问题。
质粒在细菌传代过多的情况下容易丢失，甘油保存应该没什么问题吧
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4楼2008-07-25 17:14:18
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figo.339

木虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
加入甘油后混匀了吗？我加都是加60%的甘油，与菌液对半加入
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5楼2008-07-25 21:43:24
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liumikewolf

金虫 (小有名气)
这4个月中间有几次停电，反复的冻融影响有多大？
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6楼2008-07-26 14:45:26
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shensc727

金虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
反复冻融影响不大！我经常反复冻融接菌，从来没有出现问题！
最大的可能就是你的甘油管做的有问题，菌都已经冻死了！在抗性平板上筛选一下吧！
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7楼2008-07-28 14:21:52
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argnout

金虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
我都是摇一摇直接放进去-70度,划菌时不用融,直接用接种环刮一下划线
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8楼2008-08-01 11:32:55
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phytoman

银虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx
在一个稀释梯度，减少甘油对大肠杆菌的影响
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9楼2008-08-05 10:45:00
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hanjun80

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
引用回帖:
Originally posted by liumikewolf at 2008-7-26 14:45:
这4个月中间有几次停电，反复的冻融影响有多大？

反复冻融是有影响的：

有人做过实验，反复冻融六次，相当于用超声波破碎几分钟……
具体的数值我忘记了……
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我笃信:人定胜天！
10楼2008-08-05 12:03:52
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