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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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liumikewolf

金虫 (小有名气)

[交流] 甘油管保种,质粒丢失原因?

甘油管保藏大肠杆菌,内含amp 和km 抗性质粒,保存4个月后,接种液体抗性培养基,没有生长!难道质粒丢失了吗?急寻答案!!!!!!!!
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figo.339

木虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
加入甘油后混匀了吗?我加都是加60%的甘油,与菌液对半加入
5楼2008-07-25 21:43:24
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)


lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):呵呵,谢谢
不应该吧,你转到板子上看看,看能不能生长,让它复苏一下,再液体培养,如果这样还不行,是不是你保存的不好,细胞冻死了
2楼2008-07-25 10:46:59
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春雨秋实

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):thx
你冻存是用的80%的甘油吗?在冻存管中菌液取0.8ml,80%甘油0.2ml
一般冻存的菌株采用“慢冻速溶”的方法,就是在冻存时,准备冻存菌液要先在4C°冰箱中4h,再放入-20C°冰箱中过夜,次日放入-80C°超低温冰箱中保藏。如果直接放入
-80C°超低温冰箱中容易将菌种冻死。
解冻时应该快速,直接从-80C°超低温冰箱中取出,在30C°水浴锅中放置1~2min,解冻后在平皿上涂平板,菌株复活后,在平皿上划线,纯化菌株后,挑单菌落至试管斜面。
我想你的菌株冻死的可能性较大
3楼2008-07-25 11:10:01
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Frank2007198

铜虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
我们实验室在冻存细菌时都是在—80度冰箱里直来直去的,没有采用楼上所说的方法,也没出过什么问题。
质粒在细菌传代过多的情况下容易丢失,甘油保存应该没什么问题吧
4楼2008-07-25 17:14:18
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