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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 甘油管保种，质粒丢失原因？
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hiablen

金虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
引用回帖:
Originally posted by 春雨秋实 at 2008-7-25 11:10:
你冻存是用的80%的甘油吗？在冻存管中菌液取0.8ml，80%甘油0.2ml
一般冻存的菌株采用“慢冻速溶”的方法，就是在冻存时，准备冻存菌液要先在4C°冰箱中4h，再放入-20C°冰箱中过夜，次日放入-80C°超低温冰箱中保 ...

不是吧，应该是快冻慢融吧。我都是这么做的，但是没有什么问题啊
如果甘油的浓度控制不好，可能会导致质粒的丢失的。一个工程师如是说，所以把甘油控制在8%-10%之间应该没有什么问题的。
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每天一登录，开心领金币！
11楼2008-08-05 18:24:27
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):欢迎常来，积极交流
"接种液体抗性培养基，没有生长！难道质粒丢失了吗？"

看了楼主描述和楼上几位虫子的回答，强烈认同2，3楼意见

如果当初保存菌种确实没问题，质粒是不会丢的，不能说没长就是丢失

长期保存的菌种需要在平板上活化一下，（减少抗生素对菌体伤害），然后再去接种

到液体培养基

个人认为与甘油无重大关系
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12楼2008-08-08 01:30:38
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论 ~~
如果当时保种时甘油的浓度等没有问题的话，我觉着是复苏的问题。一般冻存的菌株要在平板上活化一下的，直接用液体培养基可能会有些问题。还有你是多少时间后发现没有长出菌来的，过夜培养？？这个时间估计比平时要长一些的。
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位卑未敢忘忧国。
13楼2008-08-08 06:44:49
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liumikewolf

金虫 (小有名气)
谢谢大家的宝贵意见,
我也认为中间的平板复苏是必要的.
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14楼2008-11-10 14:40:23
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veronica5129

铜虫 (初入文坛)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论 ~~
一般保存在15%-30%（最终混合浓度）的甘油里都没问题。
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性格决定命运
15楼2008-11-10 15:04:21
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zhaoxiag

银虫 (小有名气)
是不是抗生素的浓度有问题？或是抗生素失效了？
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16楼2008-11-10 16:17:16
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right7888

新虫 (初入文坛)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论 ~~鼓励新虫~
保存久了会有质粒丢失的现象，我们差不多保存了一年多后再用要做下PCR。不过你的才4个月，应该不是。
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17楼2008-11-10 22:25:04
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