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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 甘油管保种，质粒丢失原因？
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liumikewolf

金虫 (小有名气)

[交流] 甘油管保种，质粒丢失原因？

甘油管保藏大肠杆菌，内含amp 和km 抗性质粒，保存4个月后，接种液体抗性培养基，没有生长！难道质粒丢失了吗？急寻答案!!!!!!!!
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1楼 2008-07-25 09:47:30
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chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):欢迎常来，积极交流
"接种液体抗性培养基，没有生长！难道质粒丢失了吗？"

看了楼主描述和楼上几位虫子的回答，强烈认同2，3楼意见

如果当初保存菌种确实没问题，质粒是不会丢的，不能说没长就是丢失

长期保存的菌种需要在平板上活化一下，（减少抗生素对菌体伤害），然后再去接种

到液体培养基

个人认为与甘油无重大关系
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12楼2008-08-08 01:30:38
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yaoyaochong

银虫 (正式写手)
★
lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):呵呵，谢谢
不应该吧，你转到板子上看看，看能不能生长，让它复苏一下，再液体培养，如果这样还不行，是不是你保存的不好，细胞冻死了
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2楼2008-07-25 10:46:59
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春雨秋实

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):thx
你冻存是用的80%的甘油吗？在冻存管中菌液取0.8ml，80%甘油0.2ml
一般冻存的菌株采用“慢冻速溶”的方法，就是在冻存时，准备冻存菌液要先在4C°冰箱中4h，再放入-20C°冰箱中过夜，次日放入-80C°超低温冰箱中保藏。如果直接放入
-80C°超低温冰箱中容易将菌种冻死。
解冻时应该快速，直接从-80C°超低温冰箱中取出，在30C°水浴锅中放置1~2min，解冻后在平皿上涂平板，菌株复活后，在平皿上划线，纯化菌株后，挑单菌落至试管斜面。
我想你的菌株冻死的可能性较大
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3楼2008-07-25 11:10:01
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Frank2007198

铜虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
我们实验室在冻存细菌时都是在—80度冰箱里直来直去的，没有采用楼上所说的方法，也没出过什么问题。
质粒在细菌传代过多的情况下容易丢失，甘油保存应该没什么问题吧
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4楼2008-07-25 17:14:18
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