甘油管保藏大肠杆菌，内含amp 和km 抗性质粒，保存4个月后，接种液体抗性培养基，没有生长！难道质粒丢失了吗？急寻答案!!!!!!!! 返回小木虫查看更多
在一个稀释梯度，减少甘油对大肠杆菌的影响
"接种液体抗性培养基，没有生长！难道质粒丢失了吗？" 看了楼主描述和楼上几位虫子的回答，强烈认同2，3楼意见 如果当初保存菌种确实没问题，质粒是不会丢的，不能说没长就是丢失 长期保存的菌种需要在平板上活化一下，（减少抗生素对菌体伤害），然后再去接种 到液体培养基 个人认为与甘油无重大关系
如果当时保种时甘油的浓度等没有问题的话，我觉着是复苏的问题。一般冻存的菌株要在平板上活化一下的，直接用液体培养基可能会有些问题。还有你是多少时间后发现没有长出菌来的，过夜培养？？这个时间估计比平时要长一些的。
谢谢大家的宝贵意见, 我也认为中间的平板复苏是必要的.
一般保存在15%-30%（最终混合浓度）的甘油里都没问题。
是不是抗生素的浓度有问题？或是抗生素失效了？
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京公网安备 11010802022153号
在一个稀释梯度，减少甘油对大肠杆菌的影响
反复冻融是有影响的：
有人做过实验，反复冻融六次，相当于用超声波破碎几分钟……
具体的数值我忘记了……
不是吧，应该是快冻慢融吧。我都是这么做的，但是没有什么问题啊
如果甘油的浓度控制不好，可能会导致质粒的丢失的。一个工程师如是说，所以把甘油控制在8%-10%之间应该没有什么问题的
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"接种液体抗性培养基，没有生长！难道质粒丢失了吗？"
看了楼主描述和楼上几位虫子的回答，强烈认同2，3楼意见
如果当初保存菌种确实没问题，质粒是不会丢的，不能说没长就是丢失
长期保存的菌种需要在平板上活化一下，（减少抗生素对菌体伤害），然后再去接种
到液体培养基
个人认为与甘油无重大关系
如果当时保种时甘油的浓度等没有问题的话，我觉着是复苏的问题。一般冻存的菌株要在平板上活化一下的，直接用液体培养基可能会有些问题。还有你是多少时间后发现没有长出菌来的，过夜培养？？这个时间估计比平时要长一些的。
谢谢大家的宝贵意见,
我也认为中间的平板复苏是必要的.
一般保存在15%-30%（最终混合浓度）的甘油里都没问题。
是不是抗生素的浓度有问题？或是抗生素失效了？