PCR直接测序与克隆后测序有什么区别 测出来的序列有什么差异么? 返回小木虫查看更多
直接测序需要你提供引物,而且引物序列是测不出来的。克隆后测序可以使用载体的通用引物,可以测出引物序列。
2楼的说得很正确
另外再加一个克隆测序的优点CR测序往往会有杂峰出现,这是PCR产物不纯和PCR时出现突变引起,而克隆了理论上就不会出现以上情况了。
赞一个.....
理论上PCR产物直接测序是很理想的——机器读数时由于正确的碱基占多数,PCR过程中产生的错误不足以影响某一碱基位点的正确阅读,而且免了克隆到大肠杆菌这一步工。 而克隆到大肠杆菌后,平板上的菌落都是单克隆子,也就是说PCR产生的错误克隆子也杂在其中。 但事实上克隆后再测序比直接测序成功率要高,究其原因,无非是胶上看着是一条带的,却经常是不同序列的混合物。,
我觉得直接测序很方便,一般情况下结果也不错。 不过是不是准确度或者精度不高呢?会不会影响发表文章的档次呢?
解释的挺好
直接测序需要你提供引物,而且引物序列是测不出来的。克隆后测序可以使用载体的通用引物,可以测出引物序列。
2楼的说得很正确
另外再加一个克隆测序的优点CR测序往往会有杂峰出现,这是PCR产物不纯和PCR时出现突变引起,而克隆了理论上就不会出现以上情况了。
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理论上PCR产物直接测序是很理想的——机器读数时由于正确的碱基占多数,PCR过程中产生的错误不足以影响某一碱基位点的正确阅读,而且免了克隆到大肠杆菌这一步工。
而克隆到大肠杆菌后,平板上的菌落都是单克隆子,也就是说PCR产生的错误克隆子也杂在其中。
但事实上克隆后再测序比直接测序成功率要高,究其原因,无非是胶上看着是一条带的,却经常是不同序列的混合物。,
我觉得直接测序很方便,一般情况下结果也不错。
不过是不是准确度或者精度不高呢?会不会影响发表文章的档次呢?
解释的挺好