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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR直接测序与克隆测序
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bao86

铁虫 (小有名气)

[交流] PCR直接测序与克隆测序

PCR直接测序与克隆后测序有什么区别
测出来的序列有什么差异么？
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1楼 2008-02-24 20:53:11
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Sanger882

银虫 (小有名气)
直接测序优点是：方便快捷，节省时间，避免了转化，克隆方面的繁琐步骤；
         缺点是：产物不稳定，送样还要附带冰盒，纯度要求高，回收纯化的产物需要达到一定的浓度才能测序，而且还要自己提供特异性引物，精确度也受一定影响；

  克隆测序的优点是：产物保存在菌体的质粒里面，稳定，可常温直接送菌液测序，无需提供特应性引物，而且测序的精确度较高；
    缺点是：步骤繁琐，包括制作高效的感受态细菌，连接，转化，克隆子阳性检测等，中间任何一个步骤都不能出现问题；
    在选择测序公司方面个人感觉：上海英骏公司PCR产物直接测序做的比较好。
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信念之火一旦燃烧，再大的暴风雨也无法阻挡！
14楼2008-05-18 11:07:39
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普通回帖

weiwei1

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
直接测序需要你提供引物，而且引物序列是测不出来的。克隆后测序可以使用载体的通用引物，可以测出引物序列。
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2楼2008-02-25 09:53:05
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booksworm

铜虫 (小有名气)
2楼的说得很正确
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3楼2008-02-25 10:59:13
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njlf1258

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
另外再加一个克隆测序的优点CR测序往往会有杂峰出现,这是PCR产物不纯和PCR时出现突变引起,而克隆了理论上就不会出现以上情况了。
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4楼2008-02-25 14:30:32
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gp88888888

木虫 (正式写手)

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5楼2008-02-25 15:15:16
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葬花人

铜虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
理论上PCR产物直接测序是很理想的——机器读数时由于正确的碱基占多数，PCR过程中产生的错误不足以影响某一碱基位点的正确阅读，而且免了克隆到大肠杆菌这一步工。
而克隆到大肠杆菌后，平板上的菌落都是单克隆子，也就是说PCR产生的错误克隆子也杂在其中。
但事实上克隆后再测序比直接测序成功率要高，究其原因，无非是胶上看着是一条带的，却经常是不同序列的混合物。
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花开易见落难寻
6楼2008-02-26 01:21:28
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微微ing

金虫 (小有名气)
我觉得直接测序很方便，一般情况下结果也不错。
不过是不是准确度或者精度不高呢？会不会影响发表文章的档次呢？
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7楼2008-02-26 03:32:05
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wangjun0457

银虫 (小有名气)
解释的挺好
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8楼2008-02-26 12:43:05
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lwq54

铁虫 (小有名气)
高手们多发表些意见呀，
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9楼2008-04-22 21:41:54
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piaopiaogg

铜虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
有复杂结构的好象直接测序测不出来
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10楼2008-05-10 13:05:08
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