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wrj7421

新虫 (初入文坛)

我常用直接测序,挺好用
11楼2008-05-13 23:28:22
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amilie030312

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+5,VIP+0):thank you.
reasonspare(金币+5,VIP+0):thank you.
PCR直接测序要看你纯化的好不好,或者你的产物纯不纯,如果有杂带就没办法测出来了,还有PCR产物测序或者回收产物测序引物的位置是测不出来准确结果的,而且这样测序有长度的限制,一般公司都是保证在600BP左右,而且两头的序列都不正确,如果序列在这600BP中间就可以选用这中测序方法,毕竟可以少做好多工作,克隆测序经过了菌落PCR等的检测后测序就一定可以测出正确的结果,结果有保证,但是需要你再进行大量的工作,如果还需要进行后续的实验就选这中测序方法测序。
12楼2008-05-14 11:31:23
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glenn_007

木虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx,
片段太长,或者纯度不好的用直接测序效果不好。
即使得到了目标片段的序列是部分的,不是全长。
13楼2008-05-14 11:57:14
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Sanger882

银虫 (小有名气)

直接测序优点是:方便快捷,节省时间,避免了转化,克隆方面的繁琐步骤;
         缺点是:产物不稳定,送样还要附带冰盒,纯度要求高,回收纯化的产物需要达到一定的浓度才能测序,而且还要自己提供特异性引物,精确度也受一定影响;

  克隆测序的优点是:产物保存在菌体的质粒里面,稳定,可常温直接送菌液测序,无需提供特应性引物,而且测序的精确度较高;
    缺点是:步骤繁琐,包括制作高效的感受态细菌,连接,转化,克隆子阳性检测等,中间任何一个步骤都不能出现问题;
    在选择测序公司方面个人感觉:上海英骏公司PCR产物直接测序做的比较好。
信念之火一旦燃烧,再大的暴风雨也无法阻挡!
14楼2008-05-18 11:07:39
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cuicuixxl

我也正准备选上海英俊测,直接册产物,1500BP
15楼2008-06-27 00:52:40
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