应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR直接测序与克隆测序
52/1返回列表
查看: 1567  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

bao86

铁虫 (小有名气)

[交流] PCR直接测序与克隆测序

PCR直接测序与克隆后测序有什么区别
测出来的序列有什么差异么？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-02-24 20:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sanger882

银虫 (小有名气)
直接测序优点是：方便快捷，节省时间，避免了转化，克隆方面的繁琐步骤；
         缺点是：产物不稳定，送样还要附带冰盒，纯度要求高，回收纯化的产物需要达到一定的浓度才能测序，而且还要自己提供特异性引物，精确度也受一定影响；

  克隆测序的优点是：产物保存在菌体的质粒里面，稳定，可常温直接送菌液测序，无需提供特应性引物，而且测序的精确度较高；
    缺点是：步骤繁琐，包括制作高效的感受态细菌，连接，转化，克隆子阳性检测等，中间任何一个步骤都不能出现问题；
    在选择测序公司方面个人感觉：上海英骏公司PCR产物直接测序做的比较好。
赞一下(1人) 回复此楼
信念之火一旦燃烧，再大的暴风雨也无法阻挡！
14楼2008-05-18 11:07:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

weiwei1

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
直接测序需要你提供引物，而且引物序列是测不出来的。克隆后测序可以使用载体的通用引物，可以测出引物序列。
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-02-25 09:53:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

njlf1258

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
另外再加一个克隆测序的优点CR测序往往会有杂峰出现,这是PCR产物不纯和PCR时出现突变引起,而克隆了理论上就不会出现以上情况了。
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-02-25 14:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

葬花人

铜虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):xiexie 欢迎常来,.
理论上PCR产物直接测序是很理想的——机器读数时由于正确的碱基占多数，PCR过程中产生的错误不足以影响某一碱基位点的正确阅读，而且免了克隆到大肠杆菌这一步工。
而克隆到大肠杆菌后，平板上的菌落都是单克隆子，也就是说PCR产生的错误克隆子也杂在其中。
但事实上克隆后再测序比直接测序成功率要高，究其原因，无非是胶上看着是一条带的，却经常是不同序列的混合物。
赞一下(10人) 回复此楼
花开易见落难寻
6楼2008-02-26 01:21:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭