吧这个蛋白打个质谱，分析下是什么蛋白。

等度洗脱还是线性洗脱？

如果不表达质粒，平行做实验，能看到这条带吗？
1：如果是目的蛋白分子量大于该条带，则可能是目的条带降解产物，
2：如果是该蛋白比目的蛋白大，可能是目的蛋白聚合物
3：可能是大肠杆菌自身的蛋白（有些文献会报道）

1,2比较难除去，分子量差别大考虑分子筛
3的话，过离子交换柱或其他柱子可能有效，

可能性之一是质粒带的抗性蛋白。表达量高，如果刚好有几个his，也容易挂在镍柱上。梯度洗脱可以提高纯度