求助葡聚糖凝胶色谱LH-20流速问题
我的样品首先经过大孔树脂HP20粗分，然后再用LH20纯化，75%甲醇洗脱流速1ml/min，但是再洗柱子，逐步将洗脱液换成50%甲醇、25%甲醇、水、NaOH-NaCl溶液，发现在恒流泵转速一定的情况下，流速越来越慢，25%甲醇过渡的时候只有0.5ml/min不到，是不是LH20走水相的流速会很慢吗？还是因为洗脱液里面有杂质，导致柱子堵住了？恳请大家的帮助，这个问题困扰我太长时间了，查找了相关资料也没有解决，之前这样洗柱子还可以，但是现在流速越来越慢，感觉太影响实验速度了。
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京公网安备 11010802022153号
因为是看到很多资料都说，LH20的再生，就是用NaOH和NaCl的混合溶液来脱色，也说是要梯度将洗脱液从甲醇换到水，所以我75%甲醇溶液就两个梯度置换成水，每次过渡一个柱体积，就感觉柱子是往上膨胀，流速就越来越慢，如果这样的话，那我怎么就是脱色洗柱子，难道每次都拆柱子吗，因为我的样品，每过LH20一次，都要再生一次，感觉残留的颜色太深了
，
可先过MCI
是过了MCI再上LH20吗？，
因为是跨学科读研，过柱子分离这些不是很懂，看了一些资料，越看越迷糊，只能根据文献里面已有的方法进行实验。。
那就是说我可以按照HP20-MCI-LH20这样的一个顺序试一试？