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荧光定量PCR反应需要做标曲吗

作者 Cherishqj: 来源: 小木虫 700 14 举报帖子

各位大虾，我想通过相对定量的方法比较一个基因在两个不同样本中的表达量差异，已经选择16s rRNA为内参基因，查阅了很多资料，现在有几个问题：
1.如果选择2−ΔΔCt法，是不是需要做标准曲线呢？
2.如果选择ΔCt法，需要做标曲吗？（我有个同学说他用的这个方法，当时没有做标曲，我有点困惑）
3.这两种方法可以任意选择吗，有没有什么限制
谢谢各位，祝大家实验顺利返回小木虫查看更多

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精华评论

prthefu

你是要做相对定量来比较表达差异情况，双△法，不需要做标曲。整理Ct值，做柱状图就可以比较出来。
标准曲线是绝对定量需要的。
Cherishqj

引用回帖:
3楼: Originally posted by prthefu at 2019-09-01 12:48:03
你是要做相对定量来比较表达差异情况，双△法，不需要做标曲。整理Ct值，做柱状图就可以比较出来。
标准曲线是绝对定量需要的。

可是不做标曲怎么判断引物是否设计地合理呢？
Cherishqj

引用回帖:
3楼: Originally posted by prthefu at 2019-09-01 12:48:03
你是要做相对定量来比较表达差异情况，双△法，不需要做标曲。整理Ct值，做柱状图就可以比较出来。
标准曲线是绝对定量需要的。

而且我看到了这样一段话。。应该是要做标曲的吧

360截图1624122486130110.png

，
youngen

如果没有靠谱的参考值，就需要标准曲线作参考
Cherishqj

引用回帖:
6楼: Originally posted by youngen at 2019-09-01 20:24:11
如果没有靠谱的参考值，就需要标准曲线作参考

嗯嗯，我知道了，谢谢
prthefu

引用回帖:
5楼: Originally posted by Cherishqj at 2019-09-01 20:15:37
而且我看到了这样一段话。。应该是要做标曲的吧

360截图1624122486130110.png
...

关于扩增效率，好像是都应该知道的吧，引物扩张效率要基本一致