反转录制备cDNA
以RNA为模板制备的cDNA是单链的，接下来要做荧光定量PCR，需要以cDNA为模板合成第二链吗？如果不需要的话那qPCR的模板就只有一条链，设计目的基因和内参基因引物的时候只设计一个引物吗？我觉得有点怪怪的，不知道我什么地方理解有问题，希望能有详细的解答，真心谢谢大家
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这个不需要合成第二链的。rna反转的cdna本来就是混合池，里面在反转的过程中已经有的第二链的存在。设计相关基因的引物的时候，是一对引物，通常都是根据相关基因的一条链设计的，另外一条之后反向互补，这一对引物也是可以扩增出来的。
“里面在反转的过程中已经有的第二链的存在。”咋出来的第二链？？？你给解释下呗。。
个人认为不需要，因为你的primer是一对，有一条可以和第一链结合并延伸出第二链，进而后续进行正常PCR
，
一般我们用的都是MMLV和AMV，无论哪种，收拾RNA依赖的DNA聚合酶。好像都不怎么有DNA依赖的DNA聚合活性好吧。。。