请教各位大神，小弟新手，刚上手几次western，每次结果都不太稳定，这是最近一次做的曝光图，简直丑得不忍直视，请高人指点迷津，哪里出问题了？
大概实验步骤就是用质粒转染感受态细胞，提取目的蛋白，分子量在50kd左右，marker左侧为未加巯基乙醇，marker右侧加巯基乙醇。
转膜后，5%脱脂牛奶室温封闭2h，一抗4℃孵过夜，然后用pbst洗三次，室温孵二抗2h，pbst洗三次，ecl显色曝光。然后就是下图这个样子了。
请各位大神指点！

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