【求助/交流】请问罗丹明(Rhodamine)染色怎么做?散金币
小弟需要看两个特定的酶对植物细胞的作用,需要用荧光标记技术。
大体思路是:分别用罗丹明Rhodamine和FITC 对两个不同的酶进行标记。
FITC的资料已经查到(Sigma 方法),大致如下:
Procedure of Labeling Protein with FITC
1. Preparation before experiment:
1) 配100mL,0.1M PH=8.5的SB缓冲液(0-5℃保存,且不超过一周,最好现配现用);
2) 准备好A,B,C,D四个石英比色皿;
3) 取一小容量瓶,事先用锡箔纸将其完全包住以避光;
4) 用超纯水注满D=15mm,L=300mm的柱层析分离吸附柱,过夜浸泡,同时检测其是否漏液,第二天再用PBS浸泡7-8h;
5) 用DIW浸泡葡聚糖Sephadex G-50过夜(1g Sephadex G-50配5mLDIW),使其溶胀,打开孔状结构;而后将DIW倒掉,注入适量PBS(PH=7.4),用锡箔纸盖好防灰,4℃保存;
但罗丹明标记的资料一直找不到合适的,请坐过的大大给点资料。最好有相关的网址或者什么的。 返回小木虫查看更多
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我试过用罗丹明B,但是细胞内观察不到荧光,不过我是将罗丹明B加到菌悬液里面看能否主动跨膜,没有结果
请问楼主 sigma在什么地方能查到相关的检测方法 比如 我要查PFK的酶活检测方法 我要查FDP的检测方法 从sigma订购了相关试剂 我怎么到sigma的什么地方去找这些方法 我感觉他们应该不公开的吧
那你最后怎么解决的呢 不用了?
我也是观察到荧光不明显。sigma 的方法在它的网站里面有,你先找到你要的药品,如果是很常见的药品,你到那个网页里面找找相关的信息,能够找到的
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对,因为我试了几种,都没效果,而且我是做重金属检测的,这些都不产生反应,现在在做合成,还是利用罗丹明做母体