Ki67染色阳性率高的问题
最近在做神经干细胞的Ki67染色,发现阳性率很高,有90%多,如下图中,蓝色是DAPI,红色是Ki67,Ki67红色荧光有深有浅,是我染色的问题,还是我统计的问题(我的意思是,在统计的时候,是否需要通过调整红色荧光的对比度,扣除掉一些染色原本就弱的细胞,然后再计数呢?),好多次实验都是这样的情况,实验都没办法往后做了,恳请各位指点,不胜感激!
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最近在做神经干细胞的Ki67染色,发现阳性率很高,有90%多,如下图中,蓝色是DAPI,红色是Ki67,Ki67红色荧光有深有浅,是我染色的问题,还是我统计的问题(我的意思是,在统计的时候,是否需要通过调整红色荧光的对比度,扣除掉一些染色原本就弱的细胞,然后再计数呢?),好多次实验都是这样的情况,实验都没办法往后做了,恳请各位指点,不胜感激!
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我觉得是你拍照的时候荧光强度太高了,可以用软件调一下
用细胞爬片做的吧,细胞不在一个层面,细胞核形态差异性挺大,曝光过强,红色染色强的细胞是就是假阳性,再调整一下抗体的稀释比和孵育时间,或许会好一点,希望有所帮助。↖(^ω^)↗
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