不懂啊。。。。
等待高人回答

可能情况：
1，ORF不完整或者不是预期的ORF，His没表达出来
2，His被空间结构所掩盖，建议变性后再过柱

同一ls，可能跟蛋白空间结构有关，变性后再上柱。

另外，是否是柱子本身的问题，也可以重新脱镍挂镍后再看看~~

1.标蛋白是否表达HIS 标签..
2. 柱子是新的还是以前用过的,旧的应该很好的处理一下,
3.缓冲液很重要,蛋白与柱子结合是靠离子螯合,反应环境很重要
好好做好每一步!

首先感谢各位的解答啊！不过问题还是没有解决。那个重组基因是测过序的，没有内含子的，也做过SDS－凝胶蛋白电泳，蛋白表达正确且可溶性也好，就是做纯化，挂不上柱，我想得到的是纯化后有活性的蛋白，因为后续还要做其它的用。所以不能变性后挂柱啊！各位还有什么高招啊？小妹先谢过了，

用其它纯化手段

有可能是你的his 标签掉了，另一个就是你的镍柱没有还原彻底。