RAW264.7细胞培养
最近在养RAW264.7细胞,可是细胞状态不理想,细胞在20倍镜下许多细胞出现伪足,成五角星和海星状。处理方法:PBS清洗两次,用1ml胰酶消化8分钟左右,待细胞变圆,变亮,立体感较强时,停止消化,用细胞刮刀处理,细胞刮下后,混匀2-3次,分瓶传代。
求各位大神看看传代过程有什么问题,有养过该细胞的请传授一下经验,还有用细胞刮刀处理时,力度和时间如何把握? 返回小木虫查看更多
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最近在养RAW264.7细胞,可是细胞状态不理想,细胞在20倍镜下许多细胞出现伪足,成五角星和海星状。处理方法:PBS清洗两次,用1ml胰酶消化8分钟左右,待细胞变圆,变亮,立体感较强时,停止消化,用细胞刮刀处理,细胞刮下后,混匀2-3次,分瓶传代。
求各位大神看看传代过程有什么问题,有养过该细胞的请传授一下经验,还有用细胞刮刀处理时,力度和时间如何把握? 返回小木虫查看更多
可能是我孤陋寡闻了 8min的胰酶消化还是头一次听说(我们一般都是不到1min)
好像不用细胞刮刀,加入0.25%的胰酶消化,在吸出胰酶,随后换上新鲜的血清(血清可以一直胰酶的活性),就OK啦!
我试过不用细胞刮刀,用胰酶消化,但需要很长时间,对细胞损伤较大,并且很难吹下来
ATCC上推荐用细胞刮刀的,你可以试试。我们平时养这个细胞都是用刮刀的。
谢谢回复,我最近在养这个细胞,遇到一些问题,刚买回来的细胞长得比较快,二次复苏后的细胞只能传四代左右,而且细胞都是养一段时间后出现伪足,渐渐地细胞发生裂解,最后细胞状态越来越差。我处理的方法是用胰酶消化4分钟,待细胞变圆后,用细胞刮刀处理,将其刮下传瓶。但是细胞一直养不好,希望能传授一下养该细胞的经验,不胜感激!
QQ:897623508
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你还是使用了细胞刮刀,为什么在之前还要用胰酶呢,增加对细胞的损伤。你从哪里买的细胞?买回来的时候是什么样的形态?
我用的细胞刮刀,感觉挺好的。ATCC也是这样推荐的。也有人推荐用弯头吸管把细胞吹下来。我试过,确实可以,但损失挺多的。