用盐作流动相冲洗柱子后压力过高
各位大神好，我想问一下，用NH4Ac水溶液和NH4Ac乙腈作流动相（分析样品走梯度，开始比例为50:50），分析样品完之后用90:10水：乙腈冲洗柱子30min，然后用90:10乙腈：水再冲洗60min，冲洗完柱子之后，用含盐流动相50：50平衡柱子时，为什么柱压非常高呢？基本都有300多Bar以上了。。。柱子是安捷伦Z0RBAX Eclipse XDB-C18柱。
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你先把柱子卸了看看系统压力怎么样，如果还高的话就用水大流速冲，应该是盐析。如果系统没问题的话色谱柱可以先用水小流速冲，如果还不行反过来冲一下然后正用应该就没问题了。
首先，应该排查一下压力升高的原因，如果有盐析出，应该先冲洗泵头，并用10%的乙腈水冲系统；其次，不清楚你的NH4Ac缓冲盐是多大浓度？通常，缓冲盐的浓度不超过50mmol/L；最后，再次用流动相平衡之前，应该先用10%的乙腈水冲系统30min，否则盐还会析出。
缓冲液浓度大概是5mmol/L，我用90:10水：乙腈冲洗柱子30min后用90:10乙腈：水冲洗柱子这一步是否会导致盐析出？还是说用90:10水：乙腈冲洗过柱子后，用流动相平衡之前再用90:10乙腈：水去活化柱子会比较好
，
用水冲洗柱子过程中压力会平衡下来，故此判断为已经冲洗干净？因为柱子不耐水，所以不敢用水冲洗太久，如果冲洗不干净会再次导致盐析出，所以好纳闷
前面用10%的乙腈水冲柱子（20~40倍柱体积）应该没有问题，主要在于后面再次分析时，要先把系统中的乙腈浓度降下来，才能用缓冲盐平衡，否则在浓度的乙腈水中盐容易析出
你这样洗柱子显然不太合理，且水相和有机相一比一是压力最高的混合体积，建议你洗柱子时大比例水相多冲洗一段时间，然后梯度洗脱并保存在高比例有机相中。