双酶切酶切不开或者没有质粒条带。做过质粒pcr是对的
目的片段连上T载体转化，挑了阳性单克隆送去测序是对的，可是为什么在质粒双酶切的时候有的酶切不开，甚至有的都没质粒条带。
过夜酶切的。
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过夜酶切 估计切挂了..............
玩笑
不要过夜切，一般2-3个小时足够
一般来讲，酶切久了会切散，或者直接理解为切碎。尤其是目的片段较小时，切的久了，电泳时更不容易看到条带
具体原因，说实话，也没太在意，听过的说法我也觉得好像不是很理解
，
TAKARA的酶star活性有点高，最好不要过夜切，NEB的过夜切没问题