DH5a大肠杆菌感受态细胞
DH5a大肠杆菌感受态细胞 CaCl2法总是做失败， 两次过夜活化实验室保存的菌株，取3ml活化好的菌液加入300ml新鲜LB液体培养基中，摇菌3小时左右，分装50ml一管，冰浴10min,4℃，6000rpm离心10min,弃上清，用6ml 0.1mol/L cacl2-mgcl2重悬, 冰浴10min,4℃，6000rpm离心10min,弃上清，再用0.4ml 0.1mol/L cacl2重悬,0.06ml无菌甘油，使之终浓度为15%，分装为0.01ml小管， -70℃保存。
使用了6支自制的感受态，加入连接产物转化后，离心发现沉淀挺多，涂板前发现混匀的菌液是乳白色，过夜培养总是长出成片的块斑，怀疑是制作感受态失败，求解答～谢谢
返回小木虫查看更多
今日热帖
京公网安备 11010802022153号
分装50ml之前有没有测OD值
此现象存在以下问题，1:感受态做的太好了，或者说转化率太高，可以取部分转化菌液涂板。2.有没有用液氮速冻后放于70度冰箱，这样更好。
，
不是目测，要在一定的OD值之内才行
个人觉得可以直接将感受态涂在抗性板上看看制备的感受态怎样。另外看转化效率可以先用质粒做转化试一下效率。