你在的学校或研究所单位有核酸定量仪吗？我们都是直接用定量仪测浓度，这个比值会自动显示的。

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2楼: Originally posted by reallpf at 2012-08-29 10:06:46
你在的学校或研究所单位有核酸定量仪吗？我们都是直接用定量仪测浓度，这个比值会自动显示的。

没有呢，有紫外可见分光光度计，不知道怎么分别调零，用什么溶解DNA啊

TE溶解DNA，测定时取1微升，加999微升水，紫外分光光度计如果有全波长扫描功能，直接扫一下，记录260/280即可，如我以前用过UV2401PC，挺方便的。调零使用蒸馏水即可。如果楼主手头紫外分光光度计比较简单，可以考虑准备两只比色皿（尽量挑在加蒸馏水后在260 nm 280 nm比色皿间差值不大的），一只装水调零，另一只加样品测定。

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4楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-29 22:21:53
TE溶解DNA，测定时取1微升，加999微升水，紫外分光光度计如果有全波长扫描功能，直接扫一下，记录260/280即可，如我以前用过UV2401PC，挺方便的。调零使用蒸馏水即可。如果楼主手头紫外分光光度计比较简单，可以考虑 ...

那应该用TE调零吧，因为是用TE溶解的DNA啊，我们实验室的比色皿要装到2ml作右才能让光线通过出不留空白，我上次用试剂盒法提取的dna，结果用10ul稀释到2500ul，稀释了25倍，测得吸光度是0.004，这样按计算DNA浓度（μg / μl）:OD260×稀释倍数×50/1000=0.05ug/ul,测得的OD260/OD280比值为1.4，不在1.8-2之间，我取了7ul的DNA去跑琼脂糖电泳，按道理有350ngDNA了，那个marker指示带我算了下750bp的含量是300ng总量，结果跑琼脂糖电泳标准条带都跑出来了，样品条带一点影子都没有。不知道是什么原因，另外想问下你，你们一般跑DNA琼脂糖，加多少dna总量可以跑出条带，做第一轮PCR,所加DNA的模板量里DNA含量在多少ng比较合适呢？谢谢啊，希望有经验的人指导下
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5楼: Originally posted by 胡小喜 at 2012-08-30 13:07:53
那应该用TE调零吧，因为是用TE溶解的DNA啊，我们实验室的比色皿要装到2ml作右才能让光线通过出不留空白，我上次用试剂盒法提取的dna，结果用10ul稀释到2500ul，稀释了25倍，测得吸光度是0.004，这样按计算DNA浓度（ ...

有微量比色管，可以不用稀释那么多。稀释太多误差也变大。

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5楼: Originally posted by 胡小喜 at 2012-08-30 13:07:53
那应该用TE调零吧，因为是用TE溶解的DNA啊，我们实验室的比色皿要装到2ml作右才能让光线通过出不留空白，我上次用试剂盒法提取的dna，结果用10ul稀释到2500ul，稀释了25倍，测得吸光度是0.004，这样按计算DNA浓度（ ...

你最好找微量比色皿，或者最好有核酸测定仪。DNA跑电泳，加样十微升，有200-300 ng DNA就可以看到条带（估计值，实际没测过。这个实际上还要考虑DNA大小，同样质量DNA，分子量大，摩尔数就小，电泳时就不好看到）。做PCR，哺乳动物基因组DNA，模板量应每个反应有1 微克DNA，酵母细菌质粒DNA，分别为10 ng，1 ng，1 pg

nanodrop微量紫外检测器可以直接读出数据，而且每次用量只要1微升就了。