我做过两次,都回收不到DNA。好像DNA在仍然在胶里没跑出来。。。。。 请问做透析袋纯化大片段DNA有哪些要注意的?另外有没有更好的纯化大片段DNA的方法呢? 返回小木虫查看更多
Qiagen有相关的kit!
透析袋回收本身回收效率就比较低的,不知道你回收前的DNA亮度如何, 会不会透析袋没有扎紧,有没有倒转电流通电
我觉得可能是你的DNA里含的杂质太多了 有可能是和DNA很相似的大分子杂质 缠绕在一起 我之前做过一系列比较 后来发现kit回收的效果好 国外的提取基因组的kit的那个silica膜比国内kit的效率高 我当时做的时候 是用国内的试剂盒 然后拿了一个国外kit的滤器 拼一起的 回收效率很好的 但是国内专门提基因组的kit 回收效果也不行 即使写的是40kb左右 也回收不到片段 如果你没有进口的kit 还有个办法就是用低熔点琼脂糖
不知道楼主的DNA片段有多大?我以前有做过电洗脱透析回收,我的目标片段是200kb以上的,也有回收到,只不过回收后跑胶一看却只有20几kb。我电洗脱用的是那种普通的直流电泳,后来有一个国外回来的老师教我们做的时候,电洗脱人家是用脉冲电泳就没这种问题。 另外我还用过低熔点琼脂糖加琼脂糖酶消化,最后再用milipore的超滤离心管纯化一下就好了。这个过程感觉比较简单方便。 虽然最后我还是没能成功回收我的目标片段,但是也没遇到过楼主说的那种问题。会不会是你的透析带没用缓冲液充满,扎紧后有气泡或是胶没被没过啊?还有就是电泳槽里缓冲液不够,
Qiagen有相关的kit!
透析袋回收本身回收效率就比较低的,不知道你回收前的DNA亮度如何,
会不会透析袋没有扎紧,有没有倒转电流通电
回收前亮度还可以。我的情况是DNA仍然在胶里根本没有跑动。
我觉得可能是你的DNA里含的杂质太多了 有可能是和DNA很相似的大分子杂质 缠绕在一起
我之前做过一系列比较
后来发现kit回收的效果好 国外的提取基因组的kit的那个silica膜比国内kit的效率高
我当时做的时候 是用国内的试剂盒 然后拿了一个国外kit的滤器 拼一起的
回收效率很好的
但是国内专门提基因组的kit 回收效果也不行
即使写的是40kb左右 也回收不到片段
如果你没有进口的kit
还有个办法就是用低熔点琼脂糖
不知道楼主的DNA片段有多大?我以前有做过电洗脱透析回收,我的目标片段是200kb以上的,也有回收到,只不过回收后跑胶一看却只有20几kb。我电洗脱用的是那种普通的直流电泳,后来有一个国外回来的老师教我们做的时候,电洗脱人家是用脉冲电泳就没这种问题。
另外我还用过低熔点琼脂糖加琼脂糖酶消化,最后再用milipore的超滤离心管纯化一下就好了。这个过程感觉比较简单方便。
虽然最后我还是没能成功回收我的目标片段,但是也没遇到过楼主说的那种问题。会不会是你的透析带没用缓冲液充满,扎紧后有气泡或是胶没被没过啊?还有就是电泳槽里缓冲液不够,