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做过透析袋纯化DNA的请进

作者 speculiar
来源: 小木虫 250 5 举报帖子
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我做过两次,都回收不到DNA。好像DNA在仍然在胶里没跑出来。。。。。
请问做透析袋纯化大片段DNA有哪些要注意的?另外有没有更好的纯化大片段DNA的方法呢? 返回小木虫查看更多

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  • 精华评论
  • boouy

    Qiagen有相关的kit!

  • icicle_me

    透析袋回收本身回收效率就比较低的,不知道你回收前的DNA亮度如何,
    会不会透析袋没有扎紧,有没有倒转电流通电

  • speculiar

    引用回帖:
    Originally posted by icicle_me at 2009-2-27 13:54:
    透析袋回收本身回收效率就比较低的,不知道你回收前的DNA亮度如何,
    会不会透析袋没有扎紧,有没有倒转电流通电

    回收前亮度还可以。我的情况是DNA仍然在胶里根本没有跑动。

  • badyy0202

    我觉得可能是你的DNA里含的杂质太多了 有可能是和DNA很相似的大分子杂质 缠绕在一起
    我之前做过一系列比较
    后来发现kit回收的效果好 国外的提取基因组的kit的那个silica膜比国内kit的效率高
    我当时做的时候 是用国内的试剂盒 然后拿了一个国外kit的滤器 拼一起的
    回收效率很好的
    但是国内专门提基因组的kit 回收效果也不行
    即使写的是40kb左右 也回收不到片段
    如果你没有进口的kit
    还有个办法就是用低熔点琼脂糖

  • tangxiaofu1982

    不知道楼主的DNA片段有多大?我以前有做过电洗脱透析回收,我的目标片段是200kb以上的,也有回收到,只不过回收后跑胶一看却只有20几kb。我电洗脱用的是那种普通的直流电泳,后来有一个国外回来的老师教我们做的时候,电洗脱人家是用脉冲电泳就没这种问题。
    另外我还用过低熔点琼脂糖加琼脂糖酶消化,最后再用milipore的超滤离心管纯化一下就好了。这个过程感觉比较简单方便。
    虽然最后我还是没能成功回收我的目标片段,但是也没遇到过楼主说的那种问题。会不会是你的透析带没用缓冲液充满,扎紧后有气泡或是胶没被没过啊?还有就是电泳槽里缓冲液不够,

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