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潇湘、西瓜匠

新虫 (初入文坛)

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[求助] 我pcr之后跑胶的条带模糊不清，但是能看出有条带，Marker也一样的？已有5人参与

如题，大家看下我的胶图，帮忙分析下原因。

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木有西瓜的冬天~~~

1楼 2015-12-10 00:09:10

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biostar2009

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【答案】应助回帖

引用回帖:

7楼: Originally posted by 潇湘、西瓜匠 at 2015-12-10 10:07:17
因为要区分114和91两个条带，所以可以看到确实有大于100和小于100的，用的是90伏电压，跑了1个半小时，胶浓度2%，然后就这结果，模糊不清，胶都是新制的，在胶凝固刚溶好的时候加的染色剂，电泳液没换，会不会是电 ...

114和91在琼脂胶上分出来没问题，但是并非跑得慢就一定跑得好，慢点跑一般只针对胖子，因为胖子跑快了容易掉队，于是就拖得一长串，比如跑个大几千bp的玩意。跑满的一个坏处就是扩散的问题，扩散是不可避免的，在电泳系统里面也就跟时间和温度相关，跑1个半小时，那得扩散成什么样。
你仍然用2%也行，提高点也行，然后电压提高，这跟你的电泳槽多宽有关系，跑个5V/cm的场强没问题。不是非常小的电泳槽，不纠结160V。