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[求助]
蛋白纯化不挂柱 已有5人参与
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我的蛋白n端带有his标签，多以包涵体形式存在，经过多种尝试，目前可以有少量的上清表达。对其进行纯化时，将填料和上清在4度孵育两个小时，却发现没有挂柱直接流出，求助是什么原因又可以进行什么探索。谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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你好，N端His-tag蛋白不挂NI柱，是一种比较常见的蛋白纯化问题，有多种方法可以去尝试，建议找专业高效的蛋白表达纯化公司咨询。 吐露港生物已成功构建完整的大肠杆菌原核和酵母细胞真核的蛋白表达技术平台，并可以根据客户的需求，提供从蛋白表达质粒的构建、蛋白表达条件摸索和蛋白纯化等一整套服务。http://tu.jjla.com/service_detail.php?id=154 |
10楼2015-10-12 00:22:37
恶魔的左眼
木虫 (正式写手)
- 应助: 110 (高中生)
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- 注册: 2015-03-03
- 专业: 蛋白质组学
13楼2015-10-12 15:06:11
2楼2015-10-10 01:24:47
3楼2015-10-10 09:56:58
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我的也不是完全不挂柱，就是跑胶出来看杂带多，目的蛋白少，杂带太多了～蛋白浓度也低～所以就选择包涵体了～包涵体纯化出来后的条带相当漂亮啊。因为我们做的是免疫，所以，不需要检测复性后活性～我们就直接免疫动物了～我也很想知道怎么检测～ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-10-10 10:03:25
5楼2015-10-10 10:09:08
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你的蛋白在上清中多吗？我们的重组蛋白是在大肠杆菌中表达的，低温低诱导剂长时间表达后，上清中表达会多些～我们是用的镍柱，不挂柱的时候，就会选择再生～冰上摇2小时结合～我是转专业学这个的，有些原理可能不怎么清楚，我跟我博士师兄做，他就是这么做的。希望对你有用。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2015-10-10 10:18:58
7楼2015-10-10 11:59:25
8楼2015-10-10 12:24:31
感谢参与，应助指数 +1
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9楼2015-10-11 21:46:20