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悦赏花开花落

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化不挂柱 已有5人参与

我的蛋白n端带有his标签,多以包涵体形式存在,经过多种尝试,目前可以有少量的上清表达。对其进行纯化时,将填料和上清在4度孵育两个小时,却发现没有挂柱直接流出,求助是什么原因又可以进行什么探索。谢谢!

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kxx520

新虫 (初入文坛)

我的也不是完全不挂柱,就是跑胶出来看杂带多,目的蛋白少,杂带太多了~蛋白浓度也低~所以就选择包涵体了~包涵体纯化出来后的条带相当漂亮啊。因为我们做的是免疫,所以,不需要检测复性后活性~我们就直接免疫动物了~我也很想知道怎么检测~

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4楼2015-10-10 10:03:25
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kxx520

新虫 (初入文坛)

我的和你的一样,我直接采用包涵体纯化的方法。本论坛有protocol.

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2楼2015-10-10 01:24:47
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悦赏花开花落

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kxx520 at 2015-10-10 01:24:47
我的和你的一样,我直接采用包涵体纯化的方法。本论坛有protocol.

你的也是上清部分不挂柱嘛?你包涵体复性之后,活性怎么样啊?

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3楼2015-10-10 09:56:58
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悦赏花开花落

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by kxx520 at 2015-10-10 10:03:25
我的也不是完全不挂柱,就是跑胶出来看杂带多,目的蛋白少,杂带太多了~蛋白浓度也低~所以就选择包涵体了~包涵体纯化出来后的条带相当漂亮啊。因为我们做的是免疫,所以,不需要检测复性后活性~我们就直接免疫动 ...

我的也是杂带很多,但是我的目的蛋白一点也不挂柱,我一直觉得复性风险太大,还需要摸索,所以想在上清中纯化。

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5楼2015-10-10 10:09:08
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