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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白纯化不挂柱
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悦赏花开花落

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化不挂柱 已有5人参与

我的蛋白n端带有his标签，多以包涵体形式存在，经过多种尝试，目前可以有少量的上清表达。对其进行纯化时，将填料和上清在4度孵育两个小时，却发现没有挂柱直接流出，求助是什么原因又可以进行什么探索。谢谢！

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1楼 2015-10-09 20:34:06
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kxx520

新虫 (初入文坛)
我们是把柱子再生一下～

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8楼2015-10-10 12:24:31
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kxx520

新虫 (初入文坛)
我的和你的一样，我直接采用包涵体纯化的方法。本论坛有protocol.

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2楼2015-10-10 01:24:47
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悦赏花开花落

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kxx520 at 2015-10-10 01:24:47
我的和你的一样，我直接采用包涵体纯化的方法。本论坛有protocol.

你的也是上清部分不挂柱嘛？你包涵体复性之后，活性怎么样啊？

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3楼2015-10-10 09:56:58
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kxx520

新虫 (初入文坛)
我的也不是完全不挂柱，就是跑胶出来看杂带多，目的蛋白少，杂带太多了～蛋白浓度也低～所以就选择包涵体了～包涵体纯化出来后的条带相当漂亮啊。因为我们做的是免疫，所以，不需要检测复性后活性～我们就直接免疫动物了～我也很想知道怎么检测～

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4楼2015-10-10 10:03:25
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