应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化子菌落PCR正确，但是菌液提取重组质粒一直提不到是什么原因？
201/2返回列表12下一页
查看: 2792  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 转化子菌落PCR正确，但是菌液提取重组质粒一直提不到是什么原因？ 已有6人参与

最近做质粒重组，转化子菌落PCR正确，有目的条带，但是条带不是很亮的那种，然后挑取转化子菌液培养，抗生素的浓度足够高，提取质粒，总是在第三步十分钟离心之后，上清液都有些浑浊，离心力足够大，时间足够长继续提取检测，都没有提取到质粒。试剂盒没有问题，因为同批转化的载体质粒能提取出来。
       急求各位有遇到类似问题的给出宝贵的意见，不胜感激。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
喜欢生物，所以想好好研究下去！
1楼 2015-09-03 11:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“转化子菌落PCR正确，有目的条带，但是条带不是很亮的那种”－－－－基本都是假阳性，不用继续往下做了。

做菌落PCR，最好是用载体上的引物，或者一条载体上的一条基因特异引物搭配
赞一下(3人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2015-09-04 05:06:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-04 22:58:26
因为你用的是目的基因的PCR引物，所以菌落PCR都是假阳性。如果你想菌落PCR鉴定的话，就用载体上的引物，别用你目的基因的引物。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2015-09-03 15:54:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyuanxmc

金虫 (著名写手)
没遇到过这种情况，会不会是杂菌啊

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-09-03 13:21:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2015-09-04 05:06:59
“转化子菌落PCR正确，有目的条带，但是条带不是很亮的那种”－－－－基本都是假阳性，不用继续往下做了。

做菌落PCR，最好是用载体上的引物，或者一条载体上的一条基因特异引物搭配

哦，好吧，那就是转化失败了？
赞一下(1人) 回复此楼
喜欢生物，所以想好好研究下去！
5楼2015-09-04 15:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zeroon

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
三楼四楼说的是对的，但也不一定。用目的基因的引物PCR，假阳性的条带比阳性条带要淡，这点还是能区分出来的。牙签点菌的时候别戳到培养基上，只在菌落表明粘一下就好。

另外，你提取质粒的方法操作有问题，中和后离心，上清液不会浑浊，即使菌体量没裂解完全大也不会。你好好对照分子克隆手册或者试剂盒说明书看，自己究竟哪一步有问题。这种问题都不用师兄师姐演示的，因为太简单了，说白了就是你操作问题。
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-05 17:21:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
6楼: Originally posted by zeroon at 2015-09-05 17:21:39
三楼四楼说的是对的，但也不一定。用目的基因的引物PCR，假阳性的条带比阳性条带要淡，这点还是能区分出来的。牙签点菌的时候别戳到培养基上，只在菌落表明粘一下就好。

另外，你提取质粒的方法操作有问题，中和 ...

之前提取质粒一直都没有问题，就这次出现这样的情况，重复了一次，还这样，不知是不是菌液中没有质粒造成的？
赞一下 回复此楼
喜欢生物，所以想好好研究下去！
7楼2015-09-06 07:52:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰霜之灵

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒没有转到细胞里面去
赞一下 回复此楼
8楼2015-09-06 10:24:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yc113078

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以肯定是你转化失败了，可以考虑下抗生素是否失效。
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-06 11:22:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x960495082

木虫 (正式写手)
建议用测序引物做PCR。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2015-09-06 12:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wu-ke-da 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭