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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化子菌落PCR正确，但是菌液提取重组质粒一直提不到是什么原因？
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
9楼: Originally posted by yc113078 at 2015-09-06 11:22:36
可以肯定是你转化失败了，可以考虑下抗生素是否失效。

到底是转化失败，还是连接失败呢？因为阳性对照的空白质粒转进去有转化子，培养提质粒也是对的呢
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
11楼2015-09-07 08:08:53
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
10楼: Originally posted by x960495082 at 2015-09-06 12:18:31
建议用测序引物做PCR。

哦，谢谢，这样的话，是因为转化失败，还是连接失败呢？
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
12楼2015-09-07 08:09:25
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gyesang

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引用回帖:
5楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-04 15:35:02
哦，好吧，那就是转化失败了？...

不是转化失败，是你的连接失败
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13楼2015-09-08 03:09:27
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jonew

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-04 15:35:02
哦，好吧，那就是转化失败了？...

不是，重新挑斑再做，很正常，假阳性，

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借口很贱，，，
14楼2015-09-08 07:31:35
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
14楼: Originally posted by jonew at 2015-09-08 07:31:35
不是，重新挑斑再做，很正常，假阳性，
...

就是还是存在有效的菌落的，是吧？因为我也在想这个问题，既然有转化子，不就代表连接和转化成功了吗？因为平板都是加了抗性的，宿主菌又没有抗性，只有质粒载体上有抗性啊
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
15楼2015-09-08 08:12:00
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
13楼: Originally posted by gyesang at 2015-09-08 03:09:27
不是转化失败，是你的连接失败...

如果连接失败的话，为啥会在有抗性的平板上有单菌落呢？感受态没有抗性，只有质粒载体有抗性呢？
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
16楼2015-09-08 08:12:44
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jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-08 08:12:00
就是还是存在有效的菌落的，是吧？因为我也在想这个问题，既然有转化子，不就代表连接和转化成功了吗？因为平板都是加了抗性的，宿主菌又没有抗性，只有质粒载体上有抗性啊...

多挑几个，加油，，，没有问题的，，，

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借口很贱，，，
17楼2015-09-08 08:16:57
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gyesang

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引用回帖:
16楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-08 08:12:44
如果连接失败的话，为啥会在有抗性的平板上有单菌落呢？感受态没有抗性，只有质粒载体有抗性呢？...

那是载体自连或者载体没有酶切完全的结果
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18楼2015-09-10 11:56:40
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gyesang

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引用回帖:
15楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-08 08:12:00
就是还是存在有效的菌落的，是吧？因为我也在想这个问题，既然有转化子，不就代表连接和转化成功了吗？因为平板都是加了抗性的，宿主菌又没有抗性，只有质粒载体上有抗性啊...

你有什么证据表明你载体被酶切开了？拿酶切后的载体，同样加酶连接，看看是否还能长出菌落？如果有菌落长出就说明载体没有被完全酶切开
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19楼2015-09-10 11:58:35
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yangtzelv

新虫 (小有名气)
1，假阳性。
2，你挑的菌对你的抗生素有抗性，但质粒抽提裂解不完全，极有可能是染了杂菌（如芽孢杆菌及酵母等），造成了这种现象。所以先确定你的菌是否为宿主菌。如果是宿主菌，就是操作需要认真了。
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20楼2015-09-10 16:27:02
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