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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
9楼: Originally posted by yc113078 at 2015-09-06 11:22:36
可以肯定是你转化失败了,可以考虑下抗生素是否失效。

到底是转化失败,还是连接失败呢?因为阳性对照的空白质粒转进去有转化子,培养提质粒也是对的呢
喜欢生物,所以想好好研究下去!
11楼2015-09-07 08:08:53
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
10楼: Originally posted by x960495082 at 2015-09-06 12:18:31
建议用测序引物做PCR。

哦,谢谢,这样的话,是因为转化失败,还是连接失败呢?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
12楼2015-09-07 08:09:25
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
5楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-04 15:35:02
哦,好吧,那就是转化失败了?...

不是转化失败,是你的连接失败
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
13楼2015-09-08 03:09:27
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jonew

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-04 15:35:02
哦,好吧,那就是转化失败了?...

不是,重新挑斑再做,很正常,假阳性,

发自小木虫Android客户端
借口很贱,,,
14楼2015-09-08 07:31:35
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
14楼: Originally posted by jonew at 2015-09-08 07:31:35
不是,重新挑斑再做,很正常,假阳性,
...

就是还是存在有效的菌落的,是吧?因为我也在想这个问题,既然有转化子,不就代表连接和转化成功了吗?因为平板都是加了抗性的,宿主菌又没有抗性,只有质粒载体上有抗性啊
喜欢生物,所以想好好研究下去!
15楼2015-09-08 08:12:00
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
13楼: Originally posted by gyesang at 2015-09-08 03:09:27
不是转化失败,是你的连接失败...

如果连接失败的话,为啥会在有抗性的平板上有单菌落呢?感受态没有抗性,只有质粒载体有抗性呢?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
16楼2015-09-08 08:12:44
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jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-08 08:12:00
就是还是存在有效的菌落的,是吧?因为我也在想这个问题,既然有转化子,不就代表连接和转化成功了吗?因为平板都是加了抗性的,宿主菌又没有抗性,只有质粒载体上有抗性啊...

多挑几个,加油,,,没有问题的,,,

发自小木虫Android客户端
借口很贱,,,
17楼2015-09-08 08:16:57
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
16楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-08 08:12:44
如果连接失败的话,为啥会在有抗性的平板上有单菌落呢?感受态没有抗性,只有质粒载体有抗性呢?...

那是载体自连或者载体没有酶切完全的结果
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
18楼2015-09-10 11:56:40
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
15楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-08 08:12:00
就是还是存在有效的菌落的,是吧?因为我也在想这个问题,既然有转化子,不就代表连接和转化成功了吗?因为平板都是加了抗性的,宿主菌又没有抗性,只有质粒载体上有抗性啊...

你有什么证据表明你载体被酶切开了?拿酶切后的载体,同样加酶连接,看看是否还能长出菌落?如果有菌落长出就说明载体没有被完全酶切开
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
19楼2015-09-10 11:58:35
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yangtzelv

新虫 (小有名气)

1,假阳性。
2,你挑的菌对你的抗生素有抗性,但质粒抽提裂解不完全,极有可能是染了杂菌(如芽孢杆菌及酵母等),造成了这种现象。所以先确定你的菌是否为宿主菌。如果是宿主菌,就是操作需要认真了。
20楼2015-09-10 16:27:02
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