应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化子菌落PCR正确，但是菌液提取重组质粒一直提不到是什么原因？
51/1返回列表
查看: 2786  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 转化子菌落PCR正确，但是菌液提取重组质粒一直提不到是什么原因？ 已有6人参与

最近做质粒重组，转化子菌落PCR正确，有目的条带，但是条带不是很亮的那种，然后挑取转化子菌液培养，抗生素的浓度足够高，提取质粒，总是在第三步十分钟离心之后，上清液都有些浑浊，离心力足够大，时间足够长继续提取检测，都没有提取到质粒。试剂盒没有问题，因为同批转化的载体质粒能提取出来。
       急求各位有遇到类似问题的给出宝贵的意见，不胜感激。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
喜欢生物，所以想好好研究下去！
1楼 2015-09-03 11:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
6楼: Originally posted by zeroon at 2015-09-05 17:21:39
三楼四楼说的是对的，但也不一定。用目的基因的引物PCR，假阳性的条带比阳性条带要淡，这点还是能区分出来的。牙签点菌的时候别戳到培养基上，只在菌落表明粘一下就好。

另外，你提取质粒的方法操作有问题，中和 ...

之前提取质粒一直都没有问题，就这次出现这样的情况，重复了一次，还这样，不知是不是菌液中没有质粒造成的？
赞一下 回复此楼
喜欢生物，所以想好好研究下去！
7楼2015-09-06 07:52:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

chenyuanxmc

金虫 (著名写手)
没遇到过这种情况，会不会是杂菌啊

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-09-03 13:21:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-04 22:58:26
因为你用的是目的基因的PCR引物，所以菌落PCR都是假阳性。如果你想菌落PCR鉴定的话，就用载体上的引物，别用你目的基因的引物。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2015-09-03 15:54:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“转化子菌落PCR正确，有目的条带，但是条带不是很亮的那种”－－－－基本都是假阳性，不用继续往下做了。

做菌落PCR，最好是用载体上的引物，或者一条载体上的一条基因特异引物搭配
赞一下(3人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2015-09-04 05:06:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭