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liuxinyueer

木虫 (正式写手)

[求助] 求高手分析PCR条带 已有6人参与

我是直接拿上一次PCR产物直接做模版来这次PCR的
为什么最底下有条带?而且特别亮

求高手分析PCR条带
2015.8.25 CTPS1-FLAG 01.jpg
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liuxinyueer

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by thetc at 2015-08-26 11:51:37
最下面是引物二聚体--- 有可能是 引物设计时的问题  本身就存在dimer等结构
引物浓度是多少 10pmol?
这个pcr  没有什么目的性啊。。。。(必要性)...

20微摩尔
最上面那条条带是我的目的片段
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10楼2015-08-26 21:22:20
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-25 22:46:50
看大小有可能是引物二聚体,你可以试着将引物的量减半,再P一次试试
3楼2015-08-25 14:42:43
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-25 22:47:10
肯定是引物二聚体 你的目的条带很弱 二聚体很亮 说明你的PCR体系有问题
4楼2015-08-25 14:47:52
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我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-25 22:47:22
最下面那一行全是引物二聚体,引物加太多了吧,提高一下退火温度,上下游引物各0.5微升好了(25微升体系)
5楼2015-08-25 16:06:18
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