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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增后，空白组有条带，是怎么回事？
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wenhuoyeying

新虫 (正式写手)

[求助] PCR扩增后，空白组有条带，是怎么回事？ 已有1人参与

用的8F,1492R引物，扩增鱼类肠道内含物的DNA，PCR扩增后，空白组有条带，鲭鱼组没有条带，，是怎么回事？求高手分析

PCR扩增后，空白组有条带，是怎么回事？
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1楼 2016-01-20 13:55:18
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2 2016-01-20 23:09:19
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2楼2016-01-20 14:02:18
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lifechuteng

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-20 23:09:39
我感觉PCR也没有那么灵敏，如果空白组污染了扩增出了条带，那为什么鲭鱼组没有污染呢？
会不会是您不小心放反了，我感觉还是比较有可能的。
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3楼2016-01-20 16:52:12
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wenhuoyeying

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-20 16:52:12
我感觉PCR也没有那么灵敏，如果空白组污染了扩增出了条带，那为什么鲭鱼组没有污染呢？
会不会是您不小心放反了，我感觉还是比较有可能的。

你说这个情况我考虑过，但是实验时候我确认没放反，电泳时候做了两边一直都是这个结果。鲭鱼组没有污染，这个我也很困惑，想不通~~
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4楼2016-01-20 20:05:39
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wenhuoyeying

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by becklittle at 2016-01-20 14:02:18
空白有条带有两种可能，一是引物设计不合理导致自身模版扩增，不过这种情况很少而且根据设计的大小跑胶能鉴定是不是。第二最常见情况就是污染了，分子生物学的污染要比细胞学污染更难处理，东西全扔了换新的，枪台面 ...

请问你说的“根据设计的大小跑胶能鉴定是不是”这个具体要怎么设计？另外，如果是空气污染的话，应该怎么办？当然枪头，台面什么的下次会注意的。
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5楼2016-01-20 20:07:43
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匿名

用户注销 (正式写手)
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感谢参与，应助指数 +1
wenhuoyeying: 金币+10 2016-01-26 13:29:22
wenhuoyeying: 金币+10 2016-04-05 09:24:27
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6楼2016-01-20 20:25:26
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joeming123

银虫 (小有名气)
我也遇到同样的事了。
前天做PCR  NTC没有条带，昨天按照一样的方法，NTC也有很亮的条带。
不知道是什么污染了，今天准备换个实验室，试试。  不知道会不会有所改善！
真是捉急， 都开始怀疑是自己把试剂污染了！
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wenhuoyeying
现在的路越来越难走
7楼2016-01-21 09:04:06
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wenhuoyeying

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by joeming123 at 2016-01-21 09:04:06
我也遇到同样的事了。
前天做PCR  NTC没有条带，昨天按照一样的方法，NTC也有很亮的条带。
不知道是什么污染了，今天准备换个实验室，试试。  不知道会不会有所改善！
真是捉急， 都开始怀疑是自己把试剂污染了 ...

你做出来后，结果跟我说下吧，我们交流下~~
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8楼2016-01-22 13:13:52
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joeming123

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wenhuoyeying at 2016-01-22 13:13:52
你做出来后，结果跟我说下吧，我们交流下~~...

我换了实验室做，NTC还是有亮带。  后来我把整个PCR的试剂都换了，NTC就没有亮带了。
      PCR 的NTC有亮带，主要有两个原因，
1、实验室污染比较严重。  我的解决方案是：用10%的次氯酸钠擦拭桌面，板子和枪都擦一下，然后用紫外灯照半个小时。  第二天早上先用蒸馏水擦拭，最后在用酒精擦拭一遍。
2. 试剂污染。  除了样品以外，把整个实验室用到的试剂都换了。
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现在的路越来越难走
9楼2016-01-22 16:22:31
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