24小时热门版块排行榜    

查看: 3006  |  回复: 8

wenhuoyeying

新虫 (正式写手)

[求助] PCR扩增后,空白组有条带,是怎么回事? 已有1人参与

用的8F,1492R引物,扩增鱼类肠道内含物的DNA,PCR扩增后,空白组有条带,鲭鱼组没有条带,,是怎么回事?求高手分析

PCR扩增后,空白组有条带,是怎么回事?
2015..png
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2 2016-01-20 23:09:19
本帖仅楼主可见
2楼2016-01-20 14:02:18
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

lifechuteng

新虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-20 23:09:39
我感觉PCR也没有那么灵敏,如果空白组污染了扩增出了条带,那为什么鲭鱼组没有污染呢?
会不会是您不小心放反了,我感觉还是比较有可能的。
3楼2016-01-20 16:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wenhuoyeying

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-20 16:52:12
我感觉PCR也没有那么灵敏,如果空白组污染了扩增出了条带,那为什么鲭鱼组没有污染呢?
会不会是您不小心放反了,我感觉还是比较有可能的。

你说这个情况我考虑过,但是实验时候我确认没放反,电泳时候做了两边一直都是这个结果。鲭鱼组没有污染,这个我也很困惑,想不通~~
4楼2016-01-20 20:05:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wenhuoyeying

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by becklittle at 2016-01-20 14:02:18
空白有条带有两种可能,一是引物设计不合理导致自身模版扩增,不过这种情况很少而且根据设计的大小跑胶能鉴定是不是。第二最常见情况就是污染了,分子生物学的污染要比细胞学污染更难处理,东西全扔了换新的,枪台面 ...

请问你说的“根据设计的大小跑胶能鉴定是不是”这个具体要怎么设计?另外,如果是空气污染的话,应该怎么办?当然枪头,台面什么的下次会注意的。
5楼2016-01-20 20:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wenhuoyeying: 金币+10 2016-01-26 13:29:22
wenhuoyeying: 金币+10 2016-04-05 09:24:27
本帖仅楼主可见
6楼2016-01-20 20:25:26
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

joeming123

银虫 (小有名气)

我也遇到同样的事了。
前天做PCR  NTC没有条带,昨天按照一样的方法,NTC也有很亮的条带。
不知道是什么污染了,今天准备换个实验室,试试。  不知道会不会有所改善!
真是捉急, 都开始怀疑是自己把试剂污染了!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

现在的路越来越难走
7楼2016-01-21 09:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wenhuoyeying

新虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by joeming123 at 2016-01-21 09:04:06
我也遇到同样的事了。
前天做PCR  NTC没有条带,昨天按照一样的方法,NTC也有很亮的条带。
不知道是什么污染了,今天准备换个实验室,试试。  不知道会不会有所改善!
真是捉急, 都开始怀疑是自己把试剂污染了 ...

你做出来后,结果跟我说下吧,我们交流下~~
8楼2016-01-22 13:13:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joeming123

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wenhuoyeying at 2016-01-22 13:13:52
你做出来后,结果跟我说下吧,我们交流下~~...

我换了实验室做,NTC还是有亮带。  后来我把整个PCR的试剂都换了,NTC就没有亮带了。
      PCR 的NTC有亮带,主要有两个原因,
1、实验室污染比较严重。  我的解决方案是:用10%的次氯酸钠擦拭桌面,板子和枪都擦一下,然后用紫外灯照半个小时。  第二天早上先用蒸馏水擦拭,最后在用酒精擦拭一遍。
2. 试剂污染。  除了样品以外,把整个实验室用到的试剂都换了。
现在的路越来越难走
9楼2016-01-22 16:22:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wenhuoyeying 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见