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liuxinyueer

木虫 (正式写手)

[求助] 求高手分析PCR条带 已有6人参与

我是直接拿上一次PCR产物直接做模版来这次PCR的
为什么最底下有条带？而且特别亮

求高手分析PCR条带
2015.8.25 CTPS1-FLAG 01.jpg
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1楼 2015-08-25 13:03:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-25 22:46:50
看大小有可能是引物二聚体，你可以试着将引物的量减半，再P一次试试
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3楼2015-08-25 14:42:43
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673643401

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-25 22:47:10
肯定是引物二聚体 你的目的条带很弱 二聚体很亮 说明你的PCR体系有问题
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4楼2015-08-25 14:47:52
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我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-25 22:47:22
最下面那一行全是引物二聚体，引物加太多了吧，提高一下退火温度，上下游引物各0.5微升好了（25微升体系）
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5楼2015-08-25 16:06:18
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普通回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)
引物二聚体？
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2楼2015-08-25 14:09:14
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liuxinyueer

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 我是鱼豆腐 at 2015-08-25 16:06:18
最下面那一行全是引物二聚体，引物加太多了吧，提高一下退火温度，上下游引物各0.5微升好了（25微升体系）

我是20微升体系上下游引物各加了0.4微升
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6楼2015-08-25 22:47:10
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dd2531742233

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物二聚体，不是做rtpcr的话 不影响实验的

[ 发自小木虫客户端 ]
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我的QQ719425242
7楼2015-08-25 23:04:31
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535390882

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因该是一个引物二聚体，有目的带的话可以不用管它了
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8楼2015-08-26 11:25:06
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thetc

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liuxinyueer at 2015-08-25 22:47:10
我是20微升体系上下游引物各加了0.4微升...

最下面是引物二聚体--- 有可能是 引物设计时的问题  本身就存在dimer等结构
引物浓度是多少 10pmol？
这个pcr  没有什么目的性啊。。。。（必要性）
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加入，希望能学习多一点
9楼2015-08-26 11:51:37
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liuxinyueer

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by thetc at 2015-08-26 11:51:37
最下面是引物二聚体--- 有可能是 引物设计时的问题  本身就存在dimer等结构
引物浓度是多少 10pmol？
这个pcr  没有什么目的性啊。。。。（必要性）...

20微摩尔
最上面那条条带是我的目的片段
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10楼2015-08-26 21:22:20
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