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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切图片，求大神帮忙分析
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匿名

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Bonarven

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1楼 2015-08-29 10:46:01
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
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永远元又
10楼2015-08-31 14:16:07
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疯子J-F

木虫 (著名写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-29 22:57:21
要切这么久么！我做回收连载体也就切3小时，酶的星活性，切太久就把质粒切碎了！看你的单酶切都不止一个条带的。

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2楼2015-08-29 12:23:38
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Bonarven

银虫 (初入文坛)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-29 22:57:35
质粒可能被污染了 也可能是你在配液的时候把酶混进去了 可以把原质粒单独跑胶 和marker 还有你质粒的图谱对比一下

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umaledecissionanduvetolivewiththeconcequnces
3楼2015-08-29 12:55:59
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枭翔

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-31 23:11:47
我觉得质粒没啥问题，问题在于第一你要切的质粒，是不是只有一个酶A和B位点？如果是的话，减少酶切时间，1楼说的对，酶切时间太长，会出现星活性。我尝试过酶切1.5h，结果都不错。
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4楼2015-08-29 16:00:11
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匿名

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5楼2015-08-29 18:10:29
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匿名

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6楼2015-08-29 18:11:46
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匿名

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7楼2015-08-29 18:13:01
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)
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你用的什么牌子的酶,换一下NEB的酶,切24h都没有问题,效果很好滴！

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8楼2015-08-29 18:32:36
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Bonarven

银虫 (初入文坛)
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-08-31 23:12:07
引用回帖:
6楼: Originally posted by 永远元又 at 2015-08-29 18:11:46
原质粒以前单独跑过胶，单一条带，可能是我操作问题吧。谢啦。...

没事没事 我也是新手互相扶持哈 不过我在做载体构建的时候发现质粒DNA过一定时间后会降解一些 我对比过刚刚提取质粒后和质粒提取三天后的电泳图发现3天后的电泳图会有明显拖尾 也可能是我学校实验室条件的原因导致的   不过个人建议用储存时间较短的质粒dna 片段做实验  当然只是个人建议啦采用or不采用楼主治己抉择吧 吼吼

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umaledecissionanduvetolivewiththeconcequnces
9楼2015-08-29 18:44:41
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