24小时热门版块排行榜    

查看: 1850  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ayiyaya

金虫 (小有名气)

[求助] 双抗夹心ELISA,怎么鉴定酶标抗体?

有一对配对抗体,把其中一个做了HRP标记,现在想确定HRP标记抗体的最佳工作浓度,但是目前还不知道最佳的包被抗体浓度,也不知道抗原要用多少浓度···
求指教,要如何下手?????
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ayiyaya

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 6034 at 2015-08-16 09:42:17
不知道楼主的问题解决了没有,自己也在做抗体配对,结果出现不加抗原的阴性孔也出现了明显的显色,值在0.8左右,这是不是说明抗体和酶标抗体直接反应了呢?不知道楼主有没有这方面的经验,还请赐教

我后来用PBST+BSA,37度封闭一个半小时,基本上解决了这个问题,你可以尝试一下不同的封闭条件。你的酶标抗体鉴定过没?本底怎么样?也有可能是酶标抗体标记问题。引起这种现象的原因很多,想办法验证,找到问题所在,再想办法解决就好了。
8楼2015-08-17 16:07:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

lima1988

铜虫 (小有名气)

做一系列抗体梯度包板(倍比稀释),再做酶标倍比稀释,分别交叉反应,终止读数即可
奋斗是80后不变的话题
2楼2015-07-13 11:35:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ayiyaya

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lima1988 at 2015-07-13 11:35:11
做一系列抗体梯度包板(倍比稀释),再做酶标倍比稀释,分别交叉反应,终止读数即可

谢谢!!
可是怎么确定抗原浓度呢??
3楼2015-07-13 15:23:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lima1988

铜虫 (小有名气)

保证抗原过量就行了,你首先可以做了预实验,在抗体和酶标(比如都稀释个500倍做)都相同的条件下,抗原做了梯度,看到什么浓度的时候后面的OD值是稳定的就行了
奋斗是80后不变的话题
4楼2015-07-14 10:58:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 XJXMuRjD7cK7 2026-11-13 3/150 2026-11-14 12:51 by KXypaGgBBlw7
[考博] 考博求助 10+3 社会实践对别 2026-11-08 3/150 2026-11-13 14:04 by 沐小虫252
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-13 10:55 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:20 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:36 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 8/400 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:08 by HajghKOMynmz
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 gRND4NVAZ8VG 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:42 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:25 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 7/350 2026-11-12 05:39 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-12 02:23 by 9fOTqj074tIg
信息提示
请填处理意见