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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双抗体夹心ELISA的空白孔该怎么设置？
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evonnedora

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】双抗体夹心ELISA的空白孔该怎么设置？ 已有4人参与

买了商品化elisa试剂盒，说明书上的空白孔设置是不加样品，其他的试剂都加，但是做出来的OD值很高，做了3次，都0.2左右，论坛上又看到用样品稀释液做空白孔的，还有只加显色剂和终止液做空白孔的，我做了下，稀释液的OD值0.04，只加显色剂和终止液的OD值0.09那样，到底哪个作为空白值呢？说明书上给出的空白OD值是很低的，＜0.1的。
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1楼 2010-06-11 15:53:11
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yaojc

木虫 (正式写手)
evonnedora(金币+2): 2010-06-11 16:00:05
搞错了吧，空白孔一般是样本和酶标都不加，最后加显色剂和终止液的，如果加了酶标一般会导致OD值上升的。还有检测的时候采用双波长，直接将空白扣掉吧，结果更直接。
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专注、专心、专业
2楼2010-06-11 15:57:35
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-06-11 23:26:33
evonnedora(金币+2): 2010-06-13 13:50:21
我觉得严格的空白应该是出了样品之外其他东西都加，这个样品的部分应该用稀释液也就是说要和样本等同起来，用什么稀释样本就用什么做空白。但是也有一些试剂盒如二楼说的那样。
我觉得你可以再把说明书好好看看。
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52187644
3楼2010-06-11 20:21:00
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li3564617

金虫 (小有名气)
★ ★
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-06-11 23:26:44
evonnedora(金币+2): 2010-06-13 13:50:27
空白就是不含待测物的基质。检查方法一样，怎么能不加酶标呢。我做了几十个项目了，从来都没有见过不加酶标检测空白的，至于双波长单波长和扣不扣本底都不会对检测结果有多少影响的
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4楼2010-06-11 22:39:15
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li3564617

金虫 (小有名气)
至于本底高，可能是试剂盒质量问题，要么你多洗一两此每步，看看怎么样
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5楼2010-06-11 22:41:32
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
空白就是〇
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6楼2010-06-12 09:22:05
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cyblovesun

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也出现这样的问题。而且标准曲线的零点很高吸光度，跟只加稀释液的吸光度一致，因此我觉着应该用只用稀释液不加样品的，其余正常的作为空白对照。
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7楼2012-11-29 18:55:35
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