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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELISA实验中，HRP酶标抗体浓度滴定时是否需要封闭？
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25650560

铜虫 (正式写手)

[交流] ELISA实验中，HRP酶标抗体浓度滴定时是否需要封闭？ 已有2人参与

看到不少网络上的文章以及《免疫学和免疫学检验》对HRP酶标抗体浓度滴定方法介绍如下：
引用回帖:
棋盘滴定法选择包被抗原工作浓度

（1）用包被液将抗原作一系列稀释后进行包被，洗涤。

（2）将强阳性参考血清、弱阳性参考血清和阴性参考血清用稀释液作1:100稀释，加样，保温，洗涤。

（3）加按工作浓度稀释的酶标抗人IgG抗体，保温，洗涤。

（4）加底物显色。加酸终止反应后读取A值。

（5）选择强阳性参考血清的A值为0.8左右、阴性参考血清的A值小于0.1的包被抗的的稀释度作为工作浓度。表15-1为本例的测定结果，表中数字为A值。从表中可见1:200为最舒适的工作浓度。

本人要做的试剂盒是ELISA间接法，需要对包被抗原酶标板进行封闭。而这是利用直接法进行酶标抗体的浓度滴定实验，其中并没有说明是否需要进行封闭，那么请问大家，这个步骤是否需要进行封闭呢？请说明为什么！谢谢大家了！急

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-20 at 12:23 ]
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25650560

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1楼 2009-10-20 09:34:24
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25650560

铜虫 (正式写手)
坐等高人回答
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2楼2009-10-20 09:36:31
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xxh8372
3楼2009-10-20 16:16:00
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yjj5158

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
25650560(金币+1,VIP+0):谢谢先，我的QQ是158059288，能否加我，我想向您请教一些问题！！！ 10-22 18:56
25650560(金币+5,VIP+0):再次感谢先，敬请继续关注，谢谢！ 10-22 19:07
需要进行封闭，一般用洗涤液配的1%BSA，明胶，酪蛋白或者脱脂奶粉，可以试试哪种更好
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4楼2009-10-22 10:50:34
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yjj5158

金虫 (初入文坛)
★
25650560(金币+1,VIP+0):我们是做ELISA试剂盒，主要用于检测自身抗体和感染类项目的检测。另外我想问，您所说的需要进行封闭，是你们的经验吗？或者说你们的试剂盒研发的过程中也是这么做的？但是我看很多资料里面关于酶标抗体的浓度的选择并没有说到需要进行封闭！谢谢您能继续解答，期待中！ 10-22 18:59
用明胶，酪蛋白或者脱脂奶粉进行封闭。我们公司就是做ELISA试剂盒的。你主要是检测什么的？
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5楼2009-10-22 10:52:37
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25650560

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yjj5158 at 2009-10-22 10:50:
需要进行封闭，一般用洗涤液配的1%BSA，明胶，酪蛋白或者脱脂奶粉，可以试试哪种更好

我们是做ELISA试剂盒，主要用于检测自身抗体和感染类项目的检测。另外我想问，您所说的需要进行封闭，是你们的经验吗？或者说你们的试剂盒研发的过程中也是这么做的？但是我看很多资料里面关于酶标抗体的浓度的选择并没有说到需要进行封闭，特别是网络上很多的资料，如：http://www.zysj.com.cn/lilunshuj ... nyan/1016-20-4.html里面所介绍的：
引用回帖:
1．酶标抗抗体工作浓度的选择

（1）用100ng/ml人IgG进行包被，洗涤。

（2）将酶标抗人IgG用稀释液作一系列稀释后分别加入已包被的孔中，保温、洗涤。

（3）加底物显色。加酸终止反应后，读取吸亮度（A），绘制曲线如图15-10。读取A值在1.0时的酶标抗体稀释度，作为酶标抗体的工作浓度。该酶标抗人IgG的工作浓度应为1/1600。

谢谢您能继续解答，期待中！ 或者请告诉我你们的关于这个实验的实验步骤，非常感谢
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6楼2009-10-22 19:04:35
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wangligui

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-07-21 04:35:54
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-07-21 04:36:05
你可以找《酶免疫测定技术》这本书看看，是南京大学出版的。杨利国等编著
赞一下(3人) 回复此楼
7楼2010-01-27 22:09:44
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xingwei_wei

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-07-21 04:36:02
从ELISA角度说，包被过后AG基本包被在固相载体上，封闭的作用是使AG-AB能够一对一结合，并且使AG完全包被在固相载体上，并防止变异
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没个性，不签名
8楼2010-07-20 23:17:31
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 25650560 at 2009-10-20 09:34:24:
看到不少网络上的文章以及《免疫学和免疫学检验》对HRP酶标抗体浓度滴定方法介绍如下：



本人要做的试剂盒是ELISA间接法，需要对包被抗原酶标板进行封闭。而这是利用直接 ...

当然要封阻！用BSA或者是明胶封阻，这就要看你的目的蛋白了，如果是牛乳的，最好就不要用BSA！
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人生的三大悲剧：不知道选择，不坚持选择，不断选择！
9楼2011-03-28 19:21:23
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25650560

铜虫 (正式写手)
送鲜花一朵
谢谢大家
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10楼2011-08-01 22:50:51
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