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parada0927

金虫 (小有名气)

[交流] 【转帖】HRP标记抗体 已有7人参与

有没有人做过HRP方面的标记工作，想咨询一下各位高手！
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自由生活
1楼 2010-08-10 10:13:41
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★
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看天(金币+1):鼓励 2010-08-11 11:37:17
有很多经典的方法可供参考，比如说戊二醛法，过碘酸钠法。这些都可以在免疫学实验的书上找到详细的说明。如果是为了省事，也可以购买试剂盒进行标记。
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52187644
2楼2010-08-10 10:29:59
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parada0927

金虫 (小有名气)
有没有这样的直接标记方法可以提供一下，谢谢哦！
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自由生活
3楼2010-08-10 14:23:51
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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你是做ELISA还是？HRP标记什么？说的不清不楚~
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4楼2010-08-10 14:52:01
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parada0927

金虫 (小有名气)
主要是做渗滤法的HRP的标记，不是酶联免疫法，是在硝酸纤维素膜上反应的那种
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自由生活
5楼2010-08-11 09:11:52
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320080920001

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没见过，只做过免疫印记
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6楼2010-08-11 15:31:52
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
标记方法应该都是相同的。
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52187644
7楼2010-08-11 22:18:15
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parada0927

金虫 (小有名气)
那楼上的那位能不能提供具体的标记抗体的方法呢？谢了
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自由生活
8楼2010-08-12 10:40:55
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三妹妹

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by parada0927 at 2010-08-12 10:40:55:
那楼上的那位能不能提供具体的标记抗体的方法呢？谢了

曾经做过的方法，希望对你有用：
酶标抗体（Ab-HRP）制备采用改良过碘酸钠法：10 mg HRP溶于1 mL 蒸馏水，加入新配0.06 mol/L 的过碘酸钠溶液1 mL，混匀置冰箱30min，取出后加入0.16 mol/L乙二醇水溶液1mL，于室温放置30min后加入含20 mg Ab抗体的水溶液4 mL，混匀后透析过夜，吸出加5 mg/mL NaBH4 溶液0.7mL，混匀置冰箱2h，加等体积饱和硫酸铵溶液，4℃静置1h后，3 000 r/min低温离心30min，弃上清。将沉淀用0.02 mol/L pH7.4的PBS溶解后，装入透析袋中，放入0.02 mol/L pH7.4 的磷酸盐缓冲溶液（PBS）中，4℃透析，直至NH4+去除后（奈氏试剂检测），10 000 r/min离心30min，收集上清液即得抗体的酶结合物，加入等量甘油，混匀，分装，保存于-20℃。
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9楼2010-08-12 14:45:55
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rabbit9355

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
戊二醛法连接效率不是很好，我做过碳二亚胺法，用EDC.HCL做为交联剂。
1）称取HRP5mg溶于pH6.0的磷酸盐缓冲中，再加入3.04mg的EDC和2.4mg的NHS，室温避光反应2h；
2）加入1ml0.712mg/ml的偶联溶液，4℃缓慢搅拌过夜；
3）4℃透析以除去游离的EDC，NHS和其它小分子；
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10楼2010-08-17 20:06:25
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